Questionário Prova

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Exercício 2. Replicação do DNA

1. Descreva o experimento de Meselson-Stahl. Qual seria o resultado deste experimento se a replicação do DNA fosse conservativa?
Bactérias (E.coli) foram crescidas por várias gerações em meio onde a única fonte de nitrogênio (NH4Cl) continha o isótopo “pesado” de nitrogênio (15N) ao invés do isótopo “leve” 14N, mais abundante na natureza. O DNA isolado dessa bactérias (15NDNA) possui uma densidade cerca de 1% maior que o DNA normal (14N-DNA), o que permite a separação dessas 2 espécies por centrifugação no equilíbrio em gradiente de cloreto de césio (CsCl).
As bactérias crescidas em meio contendo 15N foram transferidas para meio fresco contendo apenas o isótopo leve 14N e crescidas até dobrar o número de céulas na cultura (uma geração). O DNA isolado dessa primeira geração de células formou uma única banda após centrifugação no gradiente de CsCl, em uma posição que indicava que as moléculas de DNA dupla-fita isoladas das células-filhas eram hibridos contendo uma fita parental “pesada” e uma fita filha “leve”. Após uma segunda duplicação das células em meio contendo o isótopo leve 14N, o DNA isolado foi centrifugado e revelou a presença de 2 bandas, uma com a densidade igual a do DNA leve e outra com a densidade do DNA híbrido

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N/15N. Esse resultado forneceu evidências de que a

replicação do DNA era semi-conservativa, onde cada fita parental serve de molde para a síntese de uma nova fita de DNA.
Se a replicação do DNA fosse conservativa, seria esperado observar 2 bandas após a primeira duplicação em meio contendo o isótopo leve: uma banda com a densidade do DNA leve (14N/14N ) correspondendo as fitas-filhas, e outra banda com a densidade do DNA pesado (15N/15N) correspondendo as fitas parentais.
2. Combine as propriedades ou funções na coluna à direita com a DNA polimerase na coluna da esquerda:
(a) DNA polimerase I (1,2,3,5)

(1) envolvida na replicação

(b) DNA polimerase II (2,3)

(2)