Marcadores Moleculares

Marcadores moleculares
Pontifícia Universidade Católica de Goiás
Departamento de Biologia
Mat. Tec. Pesquisa em Biologia
Anna Karoline Gonçalves Fernandes
Raiana Borges Marinho

Marcador molecular
•

É todo e qualquer fenótipo molecular proveniente de um gene expresso, como no caso de isoenzimas, ou de um segmento específico de
DNA (correspondendo a regiões expressas ou não do genoma).

•

Marcadores baseados em restrição e hibridação de sequências de DNA;

•

Marcadores baseados em PCR (amplificação);

Marcador por Hibridação de DNA

• RFLPs (Restriction Fragment Length Polymorphism) e
• Minissatélites ou locos VNTR ('Variable Number of
Tandem Repeats').

RFLP
• Foi desenvolvido por Botstein et al. (1980).
• Por RFLP entende-se o polimorfismo no comprimento de fragmentos obtidos por corte da fita dupla de DNA, que é evidenciado pela fragmentação do DNA através do uso de enzimas de restrição.

Etapas da técnica de RFLP

MARCADORES BASEADOS EM PCR
• RAPDs (Randomly Amplified Polymorphic
DNA).
• Microssatélites.
• AFLPs
(Amplified
Fragment
Length
Polymorphism).
• SCARs (Sequence characterized amplified
RAPD) .

RAPD
•RAPD é uma técnica baseada em PCR elaborada e patenteada por
William set al(1990) nos Estados Unidos.
•A técnica possui 2 características distintas do protocolo de PCR :
- 1ª Utiliza um único primer;
- 2ª O primer único tem sequência arbitrária, portanto sua sequência alvo é desconhecida.
•O produto da reacção de RAPD realizada no termociclador é aplicado em gel de eletroforese.
•Cada primer utilizado dirige a síntese de vários segmentos de DNA simultâneamente em diversos pontos do genoma, resultando assim de várias bandas no gel.
•A grande quantidade de DNA é visualizada com brometo de etídio em luz ultra violeta.

Etapas da técnica de RAPD

Microsatélites(SSR)
• Microsatélite é uma variação da técnica de
PCR, por isso utiliza 1 par de primers específicos. • Esta técnica diferencia um indivíduo heterozigotico de um homozigotico, portanto
os