imunologia

Imunofluorescência (IFA)

- Principios da têcnica:

Anticorpo ou antigenos são conjugados (ligados de modo covalente) a uma substancia (fluorocromo), que, quando excitada por radiações UV, emite luz no espectro visivel.
Assim, como a ligação Ag-Ac é especifica, um anticorpo conjugado pode ser usado para detectar um determinado antigeno e vice-versa.
A reação é feita em lâminas de microscopia (um pouco mais finas que as comuns) e a observação tem lugar num microscópio com luz UV (microscópio de fluorescência).
Principais fluorocromos: fluoresceina (isotiocianato de fluoresceina – FITC) e rodamina ( isotiocianato de tetrametl rodamina – TRICT). Tipos: direta, indireta ou sanduiche.

IFA direta
Detecção direta de microrganismo em secreções, na urina, nas fezes, em cortes de tecido etc. Também é utilizada na fenotipagem da células tumorais.
IFA indireta
Diagnóstico sorológico de várias doenças infecciosas como a doença de chagas, a SIDA/AIDS, as hepatites e complexos em doenças auto-imunes.
É uma técnica onde se consegue alta sensibilidade (fluorescência é mais intensa) e especificidade.

Western Blotting

Eletroforese de proteínas
Identifica antígenos ou anticorpos

Radioimunensaio (RIE)

Definição
1- O termo radioimunoensaio (RIA) é mais empregado em ensaios com antigeno marcados.
2- O termo imunorradiometrico (IRMA) é utilizado em ansaios com anticorpos marcados.

Apresenta alta sensibilidade que é conferida pela detecção radioativa.
O RIA também apresenta elevada especificidade.
Graças à sua especificidade, os ensaios podem acontecer diretamente no liquido biológico.
Por causa da sua sensibilidade, o volume de amostra pode ser menor.

Vantagens:
1- Método muito sensivel, especifico e de alta afinidade
2- Baixo custo
3- Requer pouca amostra
4- Rápido

Desvantagens:
1- Instabilidade dos radioisótopos
2- Risco operacional
3- Necessidades de medidas especiais
4- Elevado custo de biossegurança e problemas com o descarte de