Imunologia

Biólogo Paulo Francisco Naoum

MÉTODOS DE AVALIAÇÃO LABORATORIAL

I) Cromatografia Cromatografia é um método físico-químico de separação. Fundamenta-se na migração diferencial dos componentes de uma mistura. É formada por duas fases imiscíveis: uma fase móvel e uma fase estacionária. De acordo com o tipo de fase móvel e estacionária utilizados as cromatografias podem classificadas em Cromatografia Gasosa, Cromatografia de Troca Iônica e HPLC (sigla de High Pressure Liquid Chromathography).

Sentido da migração

Coluna Cromatográfica

Fase Móvel

Fase Estacionária

Mistura a ser separada

a) Cromatografia Gasosa A cromatografia gasosa consiste na “vaporização” (sem que haja decomposição) da substância em um gás chamado gás de arraste, e posterior migração de uma através da coluna de cromatografia; isto é, a amostra tem que se “dissolver” ao menos em parte, em um gás que participará da composição da fase móvel. Esse gás deve, obrigatoriamente, ser inerte em relação à fase estacionária. Gases como hidrogênio, nitrogênio, argônio e hélio são os mais utilizados. As substâncias saem então da coluna e passam por um detector que gera um sinal proporcional à quantidade de substância eluída no gás em função do tempo (análise quantitativa). Por exemplo, em uma mistura, cada componente terá sua pressão

de vapor característica (volatilidade), assim substâncias que forem mais voláteis, ficarão dissolvidas no gás de arraste e passarão mais rapidamente pela coluna cromatográfica. Trata-se de uma técnica muito utilizada pois é capaz de separar substâncias com concentrações de nanogramas e até picogramas. A cromatografia gasosa é usada no fracionamento de proteínas, enzimas, peptídeos e aminoácidos.

1 2

6

4

5 3
1 – Reservatório do gás de arraste (N2 ou H2 ou He ou Ar) 2 – Local onde a amostra será injetada (“vaporização” da amostra) 3 – Coluna Cromatográfica 4 – Detector 5 – Amplificador de sinal 6 – Formação do Cromatograma (gráfico concentração de