Hplc

Páginas: 8 (1777 palavras) Publicado: 29 de maio de 2013
Universidade Federal do Ceará
Centro de Tecnologia
Departamento de Engenharia Química


















Cromatografia Líquida de Alta Eficiência - HPLC

























Fortaleza
Novembro -
Introdução

A cromatografia pode ser conceituada como um método físico-químico de separação, no qual os constituintes da amostra a seremseparados são particionados entre duas fases, uma estacionária, geralmente de grande área, e a outra um fluido insolúvel, na fase estacionária, que percola através da primeira.

A cromatografia tem cerca de 95 anos e ela tem se mostrado uma técnica incrivelmente importante para a análise de materiais com as variadas estruturas e propriedades físicas Três cientistas ganharam o prêmio Nobel devidoa seus trabalhos em cromatografia (A.J.P. Martin e R.L.M Synge da Inglaterra em 1952 e A. Tiselius da Suécia em 1948).


A cromatografia a gás demonstrou uma potencialidade enorme devido á sua eficiência, facilidade, baixo custo e possibilidade de analisar misturas voláteis de alta complexidade, por exemplo, óleos essenciais, frações de petróleo, gases industriais. A cromatografia alíquido não necessita da volatilidade, mas ela necessita da solubilidade das amostras na fase móvel e uma possível interação com a fase estacionária. Na cromatografia a gás a separação ocorre devido a interações entre as espécies analisadas e a fase estacionária, porém a fase móvel tem pouca influência na separação, na líquida as espécies que estão sendo analisadas sofrem influência enorme da faseestacionária, e ao mesmo tempo as propriedades destas são continuamente influenciadas pela fase móvel, fato que não ocorre na cromatografia a gás.

Esta técnica permite a análise das seguintes classes principais de compostos: proteínas, ácidos nucléicos, aminoácidos, corantes, polissacarídeos, explosivos, surfatantes, farmacêuticos, entre outros.

A execução experimental da HPLC

AHPLC é uma técnica que atualmente emprega um conjunto de equipamentos especiais. Eles poderão diferir em características e grau de automação, porém, são absolutamente necessários para uma execução conveniente.

Eles se caracterizam por terem os seguintes componentes:

- Reservatório e sistema de bombeamento da fase móvel;
- Sistema de introdução de amostra;
- Sistema analítico – colunacromatográfica e termostato das colunas;
- Sistema de detecção (um ou mais detectores);
- Sistema de registro e tratamento de dados;




Bombas de HPLC

As bombas empregadas em HPLC apresentam características totalmente especiais. As principais são: devem operar a pressões de até 500 atm, com a mesma precisão e exatidão de operações a pressão quase ambiente. As vazões normalmenteempregadas em HPLC analítica vão de 0,005 até no máximo 4 ou 5 ml/min. Elas não devem ser corroídas pelas fases móveis.


Os seus controles eletrônicos devem permitir, programação da vazão, possibilidade de parar o processo por razões de segurança, se a pressão não se mantiver entre os valores máximos ou mínimos preestabelecidos.

Sistema de introdução de amostra

A injeção de amostra éfeita com auxílio de válvulas especiais que permitem a introdução, com grande precisão e exatidão, de quantidades mínimas da ordem de 20 ml ou mais e, em algumas especiais, volumes próximos de 1 ml.


- Para um bom desempenho, a fase móvel e a amostra devem ser previamente filtradas, antes de entrarem na válvula de amostração. Os filtros empregados, para esse fim, têm normalmente malhasinferiores a 0,5 micra.
- Geralmente deve instalar-se um filtro na linha do solvente, antes da válvula de injeção.

Sistema Analítico - Colunas Cromatográficas

A separação na HPLC é efetuada dentro de colunas cromatográficas. Elas são geralmente construídas em metais e projetadas para trabalhar a pressões de até 500 atm. Suas dimensões dependem do processo escolhido e elas, em primeira...
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