Genética

Vectorette-PCR
Esta técnica foi desenvolvida para amplificar regiões adjacentes de DNA em regiões conhecidas e tem sido empregada para amplificar os finais de éxons 3’ e 5’, assim como ao longo dos íntrons. Pode-se obter sequências de oligonucleotídeos pela multiplicação minuciosa de espécies relacionadas.
Funciona pela digestão de DNA genômico com enzimas de restrição.

Seguido pela ligação de oligonucleotídeos sintéticos, os vectorettes.

As amplificações são realizadas com um primer de anelamento específico para o locus marcado e um primer vectorette.

Preparando um molde complementar a sequência do vectorette.

O qual só pode ser sintetizado depois que o ciclo inicial da PCR for realizado por um primer específico.

Por especificidade de primers, o primer vectorette de anelamento para o molde complementar é aumentado.
Este método foi utilizado no DNA da bactéria Chlamydia trachomatis e, foi possível analisar mais de 1,5kbp de DNA nunca antes caracterizados, usando apenas um único primer.

Inverse-PCR ou Inside-out PCR ou IPCR
É um método de rápida amplificação in vitro de sequências de DNA desconhecidas que margeiam a região da sequência conhecida. Esta técnica utiliza os primers da PCR, mas na direção oposta. O padrão para os primers reversos é um fragmento de restrição que foi ligado a outro formando um círculo. A PCR inversa é usada para amplificação e identificação de elementos transponíveis de sequências margeadas.

Hoje, o sequenciamento deveria ser o método de escolha para caracterizar um segmento de DNA desconhecido, por ser mais rápido. Ela é muito utilizada para alelotipagem e determinação de locações para cada retrovírus, transgenes e transposons (integrantes do genoma).

Nested-PCR
É usada quando é necessário o aumento da sensibilidade e/ou especificidade na PCR padrão, por exemplo: deseja-se amplificar um membro particular de uma família de genes polimorfos ou para ampliar cópias de DNA complementar (cDNA) a partir de um