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Universidade Unigranrio Fernanda Madeira Peixoto - 4206979 Procedimento Operacional Padrão de Coloração de Gram

INTRODUÇÃO Esta técnica permite distinguir células bacterianas quanto à composição das suas paredes celulares, facilitando a observação morfológica das próprias células. Em termos físico-químicos, o processo baseia-se na reação de um corante alcalino com os ácidos da célula. Por adição de lugol (solução de iodo) forma-se um complexo que, quando se aplica o álcool, desaparece ou é retido, consoante a diferente sensibilidade das paredes celulares. Torna-se assim possível distinguir entre bactérias Gram positivas (Gram +) e Gram negativas (Gram -), consoante a cor final que as células tomam. Esta coloração é um dos critérios fundamentais usados em taxonomia bacteriana, pois esta diferença de comportamento é atribuída a diferenças na composição da parede celular.

1) PRINCÍPIO DO MÉTODO Usa- se uma substância indicadora como cristal violeta (corante roxo) e lugol (mordente) , lava-se rapidamente com agua destilada e observa-se a mudança na coloração . Bactérias Gram positivas resultarão da cor ROXA e bactérias Gram negativas resultarão da cor VERMELHA . O descoramento para mais ou menos é resultante da incorreta diferenciação pelo alcool-cetona .
2) OBJETIVOS a) Aprender a preparar esfregaço de bactérias. b) Realizar a técnica de Coloração de Gram. c) Aprender o fundamento do método de coloração de Gram. d) Comparar a estrutura da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram- negativas. e) Permitir a observação da morfologia bacteriana e fornecer informações a respeito do comportamento do seu material celular diante dos corantes de Gram.

3) PROCEDIMENTOS
1. Cobrir-se o esfregaço com cristal violeta durante 1 minuto.
2. Lavar-se com água corrente (somente um fio de água) evitando incidir o jato diretamente sobre o esfregaço.
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