Extraçao de DNA

1.1. Extração do DNA;
1.1.1. Protocolo de extração de DNA de células epiteliais bucais através da metodologia Proteinase K (in house)
1.1.1.1. Limpar bancada e cobrir com papel filme
1.1.1.2. Agitar e transferir de 200 a 300 µl da amostra biológica para eppendorf autoclavado
1.1.1.3. Centrifugar por 5 minutos a 11.000 rpm o eppendorf contendo a amostra que foi transferida
1.1.1.4. Descartar sobrenadante utilizando método de pipetagem, com muito cuidado para que o as células da amostra não sejam sugadas junto.
1.1.1.5. Adicionar 500 µl de TE e agitar para que haja total homogeneização
1.1.1.6. Centrifugar por 5 minutos a 11.000 rpm o eppendorf agora contendo amostra biológica e TE.
1.1.1.7. Descartar sobrenadante utilizando método de pipetagem
1.1.1.8. Adicionar 800 µl de H2O e agitar para que haja total homogeneização
1.1.1.9. Centrifugar por 5 minutos a 11.000 rpm o eppendorf agora contendo amostra biológica e H2O.
1.1.1.10. Descartar sobrenadante utilizando método de pipetagem
1.1.1.11. Adicionar 240 µl de H2O, 80 µl de tampão para Proteinase K, 40 µl de SDS 10% e 20 µl de Proteinase K, não se esquecer de bater levemente no eppendorf para que haja homogenização.
1.1.1.12. Deixar no banho à 58°C durante o período de 1 hora e ao retirar do banho dar uma leve batida no eppendorf para que haja homogenização novamente
1.1.1.13. Adicionar 120 µl de NaCl e homogenizar por inversão
1.1.1.14. Centrifugar por 10 minutos à 11.000 rpm.
1.1.1.15. Transferir a parte superior da solução contida no eppendorf (aprox.: 400 µl), pois o NaCl não é transferido e fica no fundo do eppendorf a ser descartado.
1.1.1.16. Adicionar 800 µl de etanol 100%
1.1.1.17. Centrifugar por 10 minutos à 11.000 rpm.
1.1.1.18. Descartar sobrenadante utilizando método de pipetagem
1.1.1.19. Adicionar 500 µl de etanol 70%
1.1.1.20. Centrifugar por 10 minutos a 11.000 rpm
1.1.1.21. Descartar sobrenadante utilizando método de pipetagem
1.1.1.22. Colocar para secar em banho seco