espectrofometria

Bioquímica metabólica
Cursos: Farmácia - Biomedicina

Espectrofotometria
1. Definição:
Consiste em usar o espectro radiante para inspecionar sistemas biológicos, especialmente soluções. Um feixe de energia atravessa a solução, e a sua absorção oferece informações sobre a qualidade e quantidade dos componentes do sistema.
2. Espectrofotometria de absorção:
Consiste em passar um feixe de energia radiante através da solução e medir sua absorção. O aparelho utilizado é o espectrofotômetro, que deve ser capaz de:
a) produzir luz monocromática
b) medir a luz absorvida pelas soluções.
É constituído por:

A fonte de luz tem seu feixe focalizado pelo colimador (C) sobre um prisma de quartzo. A luz é decomposta em ultravioleta (UV), violeta (Vi), azul (Az), verde (Ve), amarelo (Am), laranja
(La), vermelho (Vr), e infravermelho (IV). Uma fenda seletora escolhe uma fina porção desse espectro como luz monocromática (MC) (apresenta um único comprimento de onda). A luz MC passa através da cubeta que contém a solução, e parte é absorvida, parte transmitida. Uma fotocélula acoplada a um galvanômetro mede a luz transmitida. A diferença é a luz absorvida. O galvanômetro tem uma escala especial de 0,0 a 2,0, que indica leituras lineares, i.e., aritmeticamente proporcionais à absorção da luz. As fontes de luz para ultravioleta são geralmente lâmpadas de hidrogênio ou de deutério. Para o visível e infravermelho, lâmpadas de tungstênio e irradiadores de cerâmica são usados. 3. Modo de operar o espectrofotômetro:
Coloca-se uma solução suporte na cubeta, acerta-se o zero do galvanômetro. Colocam-se depois soluções padrões e mede-se absorção. Por ultimo, coloca-se o desconhecido e medese a absorção. Pelo conhecimento das absorções padrões, é fácil calcular a concentração da solução desconhecida.
4. Determinação da concentração das substâncias:
Este é um dos métodos mais sensíveis e precisos para a determinação de componentes de solução. Consiste em medir a luz