Espectofotometria

Páginas: 18 (4477 palavras) Publicado: 29 de agosto de 2014
1-Introdução
A espectrofotometria é um método físico-químico muito comum em laboratórios de análises clínicas. Ela baseia-se no comportamento das moléculas ao incidir um determinado comprimento de onda que varia num intervalo entre o ultravioleta e o visível. Os estudos sobre essa técnica se iniciaram no século XVII, com o início dos estudos sobre a luz, e culminaram com a invenção doespectrofotômetro em 1940.
Luz
A luz ou luz visível ou energia radiante é uma onda eletromagnética que ao incidir nos copos é refletida em nossos olhos e por isso, podemos ver. Deve-se ressaltar que a luz tem uma característica peculiar, a sua dualidade, pois ora se comporta como onda, ora como partícula. Tal peculiaridade é evidenciada matematicamente através da equação do comprimento de onda da luz combase em sua frequência e velocidade e com base em experiências e registros matemáticos de física quântica realizado por cientista como Albert Einstein (evidenciando o modelo corpuscular da luz através do efeito fotoelétrico) e Louis De Broglie (relacionou o comprimento de onda de uma partícula à quantidade de movimento da mesma).
Essas características permitem quantificar quanto de luz foiabsorvida por determinada partícula ao receber determinado comprimento de onda.
A luz que percebemos tem como característica sua frequência que vai da faixa de 4 x1014 Hz (infravermelho) até 8 x 1014 Hz (ultravioleta). Esta faixa é a de maior emissão do Sol, por isso os órgãos visuais de todos os seres vivos estão adaptados a ela, e não podem ver além desta, como por exemplo, a radiação ultravioletae infravermelha.
Efeitos da luz em moléculas e soluções
Toda substância pode absorver energia radiante, mesmo o vidro que parece completamente transparente absorve comprimentos de ondas que pertencem ao espectro visível. Isto graças aos átomos, pois quando um comprimento de onda incide em um átomo seus elétrons são excitados, adquirindo maior energia, portanto, vão para orbitais mais altos equando retornam ao seu nível estável emitem a energia em forma de luz.
Nas moléculas, a energia radiante faz com que os átomos ou grupos de átomos vibrem com maior velocidade e maior amplitude em torno das ligações covalentes. Quando os átomos vibram (os átomos vibram em comprimentos de ondas diferentes) as ligações sofrem várias deformações. Quando estas retornam ao estado original, emitem aenergia. A absolvição de luz depende da presença de cromóforos que é a parte ou conjunto de átomos responsável pela cor.
A luz quando incide em uma solução pode sofrer refração, reflexão, espalhamento ou ser absorvida pela solução. Com isso, nem toda energia incidente é transmitida pela solução. A absorção da radiação ocorre quando a energia que é transportada por ela é igual à diferença entre doisníveis de energia das moléculas presentes em solução.
Io = Ir+ Ia+ I
Onde: Io=intensidade da luz incidente Ir=intensidade da luz refletida Ia=intensidade da luz absorvida I=intensidade da luz transmitida
Método de Bradford
Este método tem sido utilizado para a determinação de proteínas totais em diversos meios: plasma ou soro sanguíneo, saliva humana, produtos alimentícios, leite humano, tecidosde plantas, suspensões de células, urina. O corante utilizado por esse método possui como principal componente o corante BG-250. Cuja fórmula estrutural está indicada logo abaixo:










Este método é baseado na interação entre o corante BG-250 e macromoléculas de proteínas que contém aminoácidos de cadeias laterais básicas ou aromáticas. No pH de reação, a interação entre a proteínade alto peso molecular e o corante BG-250 provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para a forma aniônica, que absorve fortemente em 595 nm76. Além do corante, o reagente ainda é constituído de Metanol e ácido Fosfórico, o primeiro ajuda na solubilização do corante e provoca precipitação da proteína devido a alteração na constante dielétrica do meio, a fim de não precipitá-las em grande...
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