Dna - fingerprint

1ºPasso – Extracção e purificação do DNA

DNA Fingerprint
Torna-se difícil obter o DNA de uma amostra caso esta seja escassa, esteja degradada ou ainda contaminada. O DNA é purificado através da utilização de métodos químicos (ex: fenol, chelex, etc.)

2ºPasso (facultativo) - Processo de PCR
No caso de a amostra de DNA ser inferior ao necessário para realizar a sua análise, a reacção de polimerização em cadeia permite obter cópias de uma parte do material genético em quantidade suficiente.

3ºPasso – DNA é submetido a enzimas de restrição específicas
Esta passo baseia-se na existência de padrões repetitivos no DNA denominados de
DNA minissatélites ou ainda de VNTR’s (Variable Number of Tandem Repeats). Os VNTRs exibem uma enorme variabilidade e sendo constituídos de até centenas de pares de bases repetidos sequencialmente. Por locus, cada sonda hibridiza com dois segmentos de DNA, correspondentes aos alelos materno e paterno de cada indivíduo. Os cientistas seleccionam determinadas enzimas de restrição, que dividem o DNA nestes segmentos de restrição cujas dimensões, composição em nucleótidos e localização variam muito de pessoa para pessoa e reflectem as diferenças entre os alelos dos vários loci.

4ºPasso – Electroforese
Diferentes fragmentos de DNA movimentam-se de modo diferente quando submetidos a electroforese. Esta técnica, também denominada separação electroforética, baseia-se na migração de moléculas carregadas por aplicação de um campo eléctrico.
Este processo é frequentemente usado para separar e algumas vezes purificar macromoléculas, especialmente proteínas e ácidos nucleicos, com base no seu tamanho, peso molecular, carga eléctrica ou conformação.A electroforece de DNA é realizada em gel de agarose.
Prepara-se o gel de agarose que é imerso numa tina de electroforese com uma solução-tampão que estabelece a condução eléctrica com a fonte de alimentação. Uma vez aplicadas as amostras de DNA e o padrão de pesos moleculares nos