DESENVOLVIMENTO EXPERIMENTAL

DESENVOLVIMENTO EXPERIMENTAL
MATERIAIS, MÉTODOS, EQUIPAMENTOS E ACESSÓRIOS UTILIZADOS:
Nas separações cromatográficas em coluna, foi utilizada como adsorvente sílica gel (60-200 µm) da SilicaFlash®G60.
Solventes grau HPLC: metanol e acetonitrila. A água foi purificada em um sistema de água Millipore e as fases móveis foram passadas em um filtro de membrana de nylon com poros de 0,45 µm.
Solventes grau PA: etanol, hexano, acetato de etila e metanol.
Foram utilizados como reveladores: soluções aquosas de vanilina, N.P. e P.E.G.
As amostras foram pesadas em balança analítica Sartorius BP 210 S, com precisão de 0,0001 g.
Cromatógrafo Líquido de Alta Eficiência da Shimadzu, constituído por uma bomba solenóide com quatro canais modelo LC-20AT, detector de arranjo de diodo modelo SPD-M20A, degaseificador de membrana modelo DGU-20As, auto-injetor de amostras modelo SIL-20A, interface de comunicação modelo CBM-20A acoplado a microcomputador Pentium IV com software de integração LCsolution;
Para o tratamento das amostras (clean up) foram utilizados cartuchos com fase estacionária C18 (polimérico), todos da Phenomenex.
Em cromatografia líquida de alta eficiência utilizou-se como fase estacionária uma coluna Gemini C18 (250 x 4,6mm, 5 μm) analítica. A coluna de segurança ou pré-coluna foi um HOLDER® bicompartilhado contendo, em seu interior, um cartucho de segurança C18 (4 x 30mm, 5µm), adquirido da Phenomenex® (Torrance, CA, USA);
Seringas descartáveis de 5mL; filtro de seringa de nylon de 17mm (Tedia Brasil); pipetas calibradas da Labmate de 100 a 1000µL; ponteiras de 1000µL; vials de amostra de 1,5 mL;
Ultrassom da BRANSON 2510.
PROCEDIMENTOS REALIZADOS
O material botânico foi coletado no dia 13 de julho de 2011, às 11:00; desidratado em estufa a 40ºC durante seis dias para retirada de umidade, obtendo-se assim 200g de material seco e triturado.
Para extração dos constituintes químicos o material foi submetido a duas extrações por maceração (fig.1) com 1