Cultivo de Fibroblastos por PrP

Páginas: 12 (2977 palavras) Publicado: 9 de abril de 2014

Artigo Original
Páginas 379 a 384
Substituição de soro bovino fetal por soro humano como suplemento para cultura de fibroblastos humanos
Autores: César Isaac1; Cristiana Nicoli de Mattos2; Francinni Mambrine Pires do Rêgo3; Larissa Nocchi Cardim2; Silvana Cereijido Altran4; André Oliveira Paggiaro5; Rafael Mamoru Carneiro Tutihashi6; Mônica Beatriz Mathor7; Marcus Castro Ferreira8Descritores: Soro. Técnicas de cultura de células. Células cultivadas. Fibroblastos. Proliferação celular.
RESUMO:
Introdução: Soro bovino fetal (SBF) é comumente usado como suplemento no meio de cultura para cultivar fibroblastos. Essa forma de suplementação, porém, não é ideal, pois a qualidade das amostras de SBF é variada e sua composição não é completamente conhecida. Além disso, o SBF podeapresentar contaminação por vírus e príons ou causar complicações imunológicas. Assim, a comunidade científica tem buscado alternativas ao uso de elementos xenobióticos em cultura celular. O soro humano pode ser uma dessas alternativas, principalmente para aplicação clínica. Métodos: Soro humano, obtido de sangue de 10 voluntários saudáveis submetidos a avaliação sorológica prévia, foi testado comosubstituto do SBF em cultura de fibroblastos humanos. As células foram cultivadas em placas multipoços, contendo Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) mais 10% de SBF (D10) ou DMEM mais 10% de soro humano (D10H). Entre 24 e 264 horas de exposição aos meios testados, as células foram contadas e os resultados foram expressos em média ± erro padrão da média, para obtenção de curvas de proliferaçãocelular.Resultados: Não houve diferença estatística entre os grupos de proliferação. Fibroblastos na presença de soro humano aparentavam ser menores e mais arredondados em comparação àqueles mantidos em D10. Conclusões: Os resultados permitem inferir que o soro humano pode substituir o SBF em cultura de fibroblastos e que fibroblastos cultivados em meio suplementado por soro humano apresentammorfologia mais semelhante àqueles in vivo.
INTRODUÇÃO

Desde o início do século XX, a comunidade científica pro­curou por métodos que permitam o isolamento e o crescimento in vitro de pele e/ou células da pele1. Atualmente, a cultura celular está se tornando uma ferramenta fundamental para pesquisa e uso terapêutico2.

Para crescimento in vitro e subsistência da célula, uma mistura especial denutrientes é necessária. Essa mistura, chamada meio de cultura, é um líquido ou gel que mantém as células em crescimento. Existem diferentes meios para o cultivo de diversos tipos de célula3. Meio de fibroblastos é universalmente suplementado com soro bovino fetal (SBF), uma mistura complexa que contém fatores de crescimento necessários à manutenção da função e proliferação celular4.

SBF éfacilmente obtido e apresenta alta concentração de fatores de crescimento e baixa concentração de gamaglobulinas, comparado a outros soros animais, fatos que contribuíram para a adoção do SBF como suplemento padrão de meio de cultura celular5.

Normalmente, o SBF é suplementado ao meio de cultura em concentração de 5% a 20%. Apresenta em sua composição mais de mil componentes diferentes, entre osquais 200 já estão definidos, como hormônios, vitaminas, nucleo­sídeos, aminoácidos, lipídios, proteínas de transporte (albumina, globina, transferrina), fatores de ligação (fibronectina e laminina), fatores de estabilização, desintoxicantes, fatores de proliferação e fatores de crescimento6.

Essa forma de suplementação não é ideal, pois as concentrações dos nutrientes podem mudar de lote paralote e a composição do SBF não é totalmente conhecida, podendo conter vírus ou príons. Complicações imunológicas podem ocorrer, uma vez que o SBF possui proteínas que estimulam a imunogenicidade humana de modo persistente7,8. 

O SBF induz ao aumento da síntese de DNA em células de baço de ratos saudáveis9 e aumenta a formação de placas de linfócitos-B em ratos, elevando a síntese de DNA e IgM...
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