Contagem de clostridium sulfito redutores e clostridium perfringens

1. OBJETIVOS
Estabelecer procedimento para a contagem de Clostridium sulfito redutores e de Clostridium perfringens em alimentos;

2. APLICAÇÃO
Aplica-se a amostras de matérias-primas e alimentos.

3. PRINCÍPIO

3.1. Contagem
Baseia-se na inoculação da amostra ou de uma diluição da mesma em meios de cultura seletivos. Após incubação em anaerobiose, os Clostridium formam colônias negras, devido à reação de redução de sulfito a sulfeto, que reage com citrato de amônio e ferro III, formando um precipitado negro.

3.2. Fermentação tempestuosa
Baseia-se na verificação da fermentação tempestuosa do leite presente no meio leite com ferro, característica do Clostridium perfringens.p
Essa fermentação caracteriza-se por formação de coágulo bem definido, com grande formação de gás, durante incubação à temperatura seletiva de 46 ± 1ºC.

3.3. Testes confirmativos
A confirmação de Clostridium perfringens se faz por meio de provas confirmativas, com as quais se evidenciam suas características de: imobilidade, redução de nitratos, produção de ácido e gás a partir da lactose, fermentação da rafinose e liquefação da gelatina.

4. MATERIAIS

4.1. Equipamentos, vidrarias e outros
Equipamentos, vidraria e demais insumos básicos obrigatórios em laboratórios de microbiologia de alimentos;

4.2. Meios de culturas e reagentes
Solução salina peptonada 0,1%;
Ágar triptose - sulfito - cicloserina (TSC)- base ou Ágar Sahid Ferguson Perfringens (SFP) –base;
Ágar estoque;
Ágar motilidade - nitrato tamponado;
Meio leite com ferro;
Meio lactose-gelatina;
Caldo vermelho de fenol-base;
Solução de rafinose 10% ;
Caldo de carne cozida (opcional caldo Tarozzi);
Meio tioglicolato;
Alfa naftilamina 0,5%;
Ácido sulfanílico 0,8%;
Solução de cicloserina 5%;
Polimixina B;
Kanamicina;
Vaspar ou óleo mineral ou parafina líquida;
Gerador de anaerobiose;
Reagentes para coloração de Gram.

5. TÉCNICA

5.1. Pesagem e preparo da amostra
Pesar 25  0,2 g da