COLORAÇÃO DE ESFREGAÇO DE MATERIAL BIOLÓGICO PELO MÉTODO DE GRAM

INTRODUÇÃO

A coloração de Gram é uma técnica de diferencial através de uma coloração que permite descobrir os dois principais grupos de bactérias por microscopia óptica: as bactérias Gram positivas e as bactérias Gram negativas.

Ela recebeu esse nome em homenagem ao seu descobridor, o patologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram.
Ele observou que alguns corantes ficavam retidos pelas células bacterianas e que estas bactérias adquiriam cores diferentes quando tratadas com corantes diferentes.
As bactérias cuja coloração ficava roxa receberam o nome de Gram – positivas, e aquelas que ficavam com um tom avermelhado, de Gram – negativas.
Nesta técnica, as bactérias são colocadas em contato com um corante violeta, denominado de Cristal Violeta, depois fixação com lugol, seguido de descoloração com álcool e coradas novamente com corante vermelho, a Fucsina Básica.

Hans Christian Joachim Gram morreu em 1935 sem ter o reconhecimento devido ao seu método de coloração.
Hoje em dia, a Coloração pelo Método de Gram é a técnica principal para a identificação e taxonomia das bactérias, sendo muito utilizada em laboratórios bacteriologistas.

OBJETIVOS DA PRÁTICA

Explicar por que bactérias com componentes estruturais diferentes podem ser diferenciadas quando coradas pelo método de Gram.

Descrever a seqüência dos procedimentos da coloração de Gram. e os princípios físico-químicos que regem cada um desses procedimentos.

Apresentar provas da existência de micróbios intimamente associados aos tecidos de nosso corpo.

MATERIAIS

• Cotonetes

• Lâminas para microscopia

• Caneta para escrever em vidro

• Solução de Cristal Violeta (constituída por 1g de cristal violeta, 10 mL de álcool a 95º GL, 2g de fenol e 100mL de água destilada)

• Solução de Lugol (constituída por 1g de iodo metálico, 2g de iodeto de potássio e 300 mL de água destilada)

• Álcool a 95º GL

• Solução de Fucsina (