boas Práticas Laboratoriais

Curso de Boas Práticas Laboratoriais

Preparo,
Identificação e
Armazenamento
de amostras biológicas Silene Peres Keusseyan
Maio/2011

Centrifugas
Poucos experimentos são realizados sem pelo menos uma passagem pela centrífuga
Usadas para separar partículas de uma solução
Em laboratórios de pesquisa biológica:
Sangue
Células
Separação de fases
Organelas
Isolamento de macromoléculas (DNA, RNA, vírus, proteínas) Centrifugação
Qual velocidade? rpm x rfc (g) ?
Qual o tipo de separação desejado?
Qual centrífuga usar?
Que temperatura?
Qual o tubo apropriado?
Qual o rotor?
Como centrifugar

Força centrífuga
A força centrífuga relativa (Rcf) cuja unidade é o g é gerada quando uma partícula ou conjunto de partículas é sujeito a um movimento circular de aceleração
Rcf (g) = 1,12 x 10-5 x R x N2
R = raio em centímetros
N = velocidade de centrifugação em rpm
1 g equivalente à aceleração da gravidade na superfície da Terra

Força centrífuga

Tipos de centrifugação
Centrifugação diferencial (separação de fases)
Amostras centrifugadas a certa velocidade resultam em sobrenadante e pélete (baseada no tamanho das partículas)
Tamanho maior sedimenta mais rápido
Ex: separação do sangue em elementos figurados e plasma / soro,

Tipos de centrifugação
Centrifugação por gradiente de densidade
Centrifugação de escala zonal
Separação de partículas com diferentes densidades
Ex: separação de mononucleares por Ficoll-Hypaque
Hemácias:1095 densidade, mononucleares 1065 e Ficoll 1077
Utiliza gradiente de meio viscoso

Sangue diluído soro plaquetas Mononucleares “nuvem”
Ficoll-Hypaque

FicollHypaque

eritrócitos granulócitos Centrífugas
Centrífuga de bancada
Centrífuga de bancada refrigerada
Centrífuga de alta velocidade
Ultracentrífuga
Microcentrífuga
Citocentrífuga

Centrífuga de bancada
Múltiplos fins: peletizar células e bactérias, sedimentação de soro, urina, células e sangue
Suporte oscilante: até