Aula TP Citogen Tica

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GENCIT
BIOMEDICINA

Karen Müller
2015

Ferramentas de análise em
CITOGENÉTICA

Análise dos Cromossomos Humanos CITOGENÉTICA Finalidade: investigação de alterações cromossômicas
Células + utilizadas: alta taxa mitótica / multiplicação in vitro linfócitos, fibroblastos, células das vilosidades coriônicas, células do líquido amniótico
Melhor fase para análise: metáfase (mitose) ! máxima condensação / prómetáfase
Cromossomos serão identificados por: tamanho, forma, posição do centrômero, técnica de bandeamento

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CARIÓTIPO

Preparo a partir de sangue total:

1) Sangue + meio de cultura + antibióticos + fitoemaglutinina
Fitoemaglutinina ! estimulação mitótica + aglutinação das hemácias
2) Adição de colchicina à cultura
Colchicina ! desagregador de fuso / parada do ciclo em metáfase
3) Adição de cromossomos solução

hipotônica

(KCl)

para

dispersar

os

4) Fixação das células com solução metanol/ác acético
5) Finalização = preparo da lâmina ! coloração

Borges-­‐Osório, 2ª ed

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Bandeamento cromossômico
Bandeamento Q
- coloração com quinacrina mostarda*
• 1ª técnica desenvolvida (anos 70)
• Visualização em microscópio de fluorescência • Principais aplicações: estudo de heteromorfismos estudos do cromossomo Y
* fluorescente

Bandeamento cromossômico
Bandeamento G
- coloração com Giemsa
• técnica + utilizada
• 1ª etapa = tripsinização
• alternância de bandas claras e escuras
• quebras e rearranjos cromossômicos
! geralmente nas bandas claras
• cada banda ± 50 genes (varia bastante)

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Bandeamento cromossômico
Bandeamento R
- aquecimento + coloração com Giemsa
- imagem “reversa” da banda G e Q
- reforça coloração das bandas não coradas com banda G

Bandeamento C
- hidróxido de sódio + coloração com Giemsa
- cora regiões de DNA repetitivo, especialmente
Centrômeros
Heterocromatinas constitutivas

Bandeamento cromossômico
Bandeamento NOR
- cora regiões