aula replicação

Replicação do DNA
Prof. Dr. Francisco Prosdocimi

Mitose / Meiose

Como acontece a síntese do
DNA?

Meselson-Stahl experiment
• 1957
• Cresceram E. coli em meio com N-15 e depois voltaram pra N-14
• Purificação do DNA das bactérias • Três tipos de DNA
– N-15 + N-15
– N-15 + N-14
– N-14 + N-14

• Ao aquecer o N-15 + N-14 e separar as fitas ficava claro que uma fita continha N-15 e outra N-14

Replicação semi-conservativa

Origens de replicação
• Locais com um contexto de sequência específico
• Ligam proteínas específicas • Quando acionadas, essas proteínas permitem o início da replicação Origens de replicação

Replicação
• DNA Polimerase III
• Sentido 5’ → 3’
• Nucleotídeos 3P são adicionados
– Liberação de
Pirofosfato

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Primase
• Ribonucleoproteína
• Liga-se à helicase em procariotos formando o chamado primossomo
• Sintetiza um primer de
RNA contendo aproximadamente 11 bases; fornece 3’ OH
• DNA polimerase lenta e sujeita a erros
• Evita a progressão da forquilha uma vez que a fita líder anda mais rápido

Micrografia, bolha de replicação Forquilhas de replicação

Forquilha de replicação

Replicação das fitas
• Fita líder
– Primase age uma vez

• Fita retardada
– Primase age várias vezes
– 1967, Fragmentos de Okasaki
Okazaki R, Okazaki T, Sakabe K, Sugimoto K. Mechanism of DNA replication possible discontinuity of DNA chain growth. Jpn J Med Sci Biol. 1967
Jun;20(3):255-60

Primase na fita retardada
• Deslocamento da forquilha de replicação
• Primase faz primer

Direções de replicação na Forquilha

Desenovelamento do DNA
• Retirada das histonas
• Proteínas de ligação a fita simples (SSBPs)
• DNA helicase
– Quebra pontes de H

• DNA topoisomerases
– Tiram a tensão

Forquilha de replicação

Polaridade da síntese define fitas líder e retardada (descontínua)

DNA polimerase
• Enzimas que catalisa a reação