apostila de aula pratica de micro biologia

Páginas: 21 (5082 palavras) Publicado: 10 de novembro de 2014
AULA PRÁTICA
PREPARO E ESTERILIZAÇÃO DE MATERIAIS

Preparo do material a ser esterilizado
Preparo das placas de petri







Selecionar 4 placas de Petri
Embalar as placas selecionadas com papel kraft conforme demonstração.
Fechar utilizando barbante.
Colocar fita indicadora de esterilização na embalagem pronta.
Esterilizar em autoclave, por 15 minutos, a 1210 C.
Após aesterilização colocar para secar em estufa.

Preparo das pipetas graduadas





Selecionar 4 pipetas graduadas de 10 mL, colocar algodão hidrófobo na
extremidade e embalar, individualmente, com papel kraft conforme
demonstração.
Colocar um pedaço de fita indicadora de esterilização.
Esterilizar em autoclave, por 15 minutos, a 1210 C.
Após a esterilização colocar para secar emestufa.

Preparo do Erlenmeyer






Selecionar 1 erlenmeyer de 250 mL e tampá-lo.
Enrolar a boca do erlenmeyer com papel kraft e passar o barbante.
Colocar um pedaço de fita indicadora de esterilização.
Esterilizar em autoclave, por 15 minutos, a 1210 C.
Após a esterilização colocar para secar em estufa.

Preparo do meio de cultura PCA






Seguir as orientações dofabricante do meio.
Pesar __________ g de meio PCA (Plate Count Agar), adicionar __________
mL de água destilada, aquecer com agitação constante até a fervura.
Transferir 20 mL do meio preparado para tubos (ainda quente, antes que
solidifique); tampá-los
Esterilizar em autoclave, por 15 minutos a 1210 C.
Após a esterilização esperar atingir a temperatura ambiente e armazenar em
geladeira a40 C.

Preparo de tubos com solução salina peptonada



Transferir 9,0 mL de solução salina peptonada para cada tubo com auxílio de
uma pipeta graduada de 10 mL.
Tampar os tubos.




Esterilizar em autoclave, por 15 minutos, a 1210 C.
Após a esterilização esperar atingir a temperatura ambiente e armazenar em
geladeira a 40 C.

Composição do meio PCA
Peptona de CaseínaExtrato de levedura
Glicose
Ägar

5,0 g
2,0 g
1,0 g
14,0 g

Preparo: Dissolver 22,5 g do meio PCA em 1 L de água destilada. O pH após esterilização
é de 7,0 ± 0,2 a 250 C.
Composição da Solução Salina Peptonada
Cloreto de sódio
Peptona
Água destilada qsp

9,0 g
1,0 g
1000 mL

Preparo: dissolver 1,0 g de peptona e 9,0 g de cloreto de sódio em 1 L de água destilada
com agitaçãocontínua.

AULA PRÁTICA
CONTAGEM DE MICRORGANISMOS TOTAIS MESOFÍLICOS
CONTAGEM EM PLACA - MÉTODO DE PROFUNDIDADE

Amostragem


Empregar técnicas assépticas na amostragem.

Procedimentos



















Realizar o teste preferencialmente em capela de fluxo laminar.
Sanitizar a bancada com algodão umIdecido com álcool 70% v/v (movimentosunidirecionais).
Ligar o bico de Bunsen.
O erlenmeyer e os tubos utilizados sempre devem ser flambados antes e após
utilização.
Identificar os materiais com as respectivas diluições (10-1, 10-2, 10-3), data de
análise, amostra analisada, lote, meio de cultura utilizado e analista.
Identificar os controles: data de análise, meio de cultura utilizado e analista.
Sanitizar a parte externa da embalagemcom algodão umedecido com álcool
70%.
Transferir parte da amostra para béquer estéril.
Transferir 10 mL da amostra com auxílio de uma pipeta graduada para o
erlenmeyer que contém 90 mL de solução tampão fosfato pH 7,2 + inativador
(______________________). Homogeneizar.
Pipetar 1,0 mL da amostra para cada placa identificada 10-1 (REALIZAR EM
DUPLICATA PARA CADA MEIO UTILIZADO).
Adicionar15 mL de meio agar caseína soja em duas placas e homogeneizar
em forma de oito ou “s” sobre a bancada.
Adicionar 15 mL de meio agar Sabouraud-dextrose em duas placas e
homogeneizar em forma de oito ou “s” sobre a bancada.
Pipetar 1,0 mL do erlenmeyer 10-1 para o tubo contendo 9,0 mL de solução de
solução tampão fosfato pH 7,2 identificado como 10-2. Homogeneizar.
Pipetar 1,0 mL do tubo...
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