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ANÁLISE DA EXPRESSÃO GENICA Centro Universitário Católica de Santa Catarina – Campus Joinville Biomedicina – Disciplina de Biologia Molecular 1 ANÁLISE BÁSICA A expressão gênica é o processo pelo qual a informação contida em um gene é traduzido em estruturas presentes em um determinado tipo celular (mRNA ou proteínas). 1.1 PRINCÍPIOS DE TRIAGEM 1.2 MÉTODOS 1.2.1 PCR 1.2.2 NORTHERN BLOT O método de Northern Blot se baseia na transferência de RNAs bandeados por eletroforese para uma membrana adequada, em geral de nylon (FIGUEIRA, 2010). Figueira (2010) afirma também que o processo pode ser feito por campo elétrico (os RNAs são negativos e migram para o pólo positivo) ou arraste hidrodinâmico. As membranas de Northern blot podem ser hibridizadas com sondas de DNA ou RNA. O nome northern é uma alusão ao nome Southern, do inventor da transferência análoga de DNA. É um método altamente sensível para a detecção de sinais fracos. É um processo lento, consome recursos, limitado ao estudo de poucos genes e exige uma grande quantidade de RNA e uma sonda marcada radioativamente. Método de Northern Blot Segundo estudo realizado na Faculdade de Ciências – Universidade de Lisboa, este método envolve as seguintes etapas: (A) Misturas de moléculas de RNA de cadeia simples (Hibridação Northern) que são separadas por electroforese com base na dimensão. (B) As moléculas de RNA são desnaturadas por exposição do DNA a…

multigênicas: grupos de genes com estrutura similar (famílias clássicas de genes – observadas em DNA codificante de RNA ribossômico) ou com função similar (superfamílias de genes, como os genes HLA e receptores das células T.) Pseudogenes (genes silenciosos, que não são codificantes – podem ter sido silenciados por mutações ou pela inserção de genes pela transcriptase reversa). Os genes nucleares podem codificar RNA mensageiro (que será traduzido em proteínas) ou outros tipos de RNA,…

Micro array É uma técnica de análise de genes em grande escala,eficiente em fornecer uma visão global na busca por perfis de expressão gênica ou análise de genômica funcional,sendo amplamente utilizada em pesquisas genéticas laboratoriais. -1989:Primeiro protótipo do Genechip(chips de nylon,plástico ou vidro que contem os oligonucleotideos, para análise de DNA Microarrays,) pela Affymetrix(empresa americana que fabrica DNA microarrays) -1994:Primeiro Genechip Affymetrix…

ANÁLISE DA EXPRESSÃO GENICA Bárbara Magagnin Moreira Centro Universitário Católica de Santa Catarina – Campus Joinville Biomedicina – Disciplina de Biologia Molecular 1 ANÁLISE BÁSICA A expressão gênica é o processo pelo qual a informação contida em um gene é traduzido em estruturas presentes em um determinado tipo celular (mRNA ou proteínas). 1.1 PRINCÍPIOS DE TRIAGEM Os testes genético são definidos como métodos para identificação de determinantes biológicos (ex.:…

simples de determinar em que momento certos genes estão a ser expressos em sistemas vivos. Neste processo, o RNA é separado numa electroforese em gel, transferido para uma membrana e detectado de forma similar ao DNA no Southern blot. Contagem FUNEC 2012 Resumo: Northern blotting O Northern Blot é uma técnica usada na pesquisa em biologia molecular para estudar a expressão gênica, ou seja, verificar se um determinado gene de um genoma é ou não transcrito em RNA e quantificar isso.…

estudos que envolveu caracterização de mutantes, níveis e localizações da expressão gênica, modificações de substratos específicos, hibridação in situ, mapeamento, interação proteínaproteína in vitro e in vivo entre outros. Essas seqüências gênicas, cujas funções já estão determinadas, servem de suporte para a identificação da função gênica de novas seqüências depositadas em bancos de dados. Quantos genes são desconhecidos hoje, comparando-se com o início dos anos 90? A comparação de…

estas características? 3. O que é uma sonda de hibridação? Qual a diferença entre sondas homólogas e heterólogas? 4. O que é a técnica de southern blotting? Descreva sua metodologia 5. Cite 3 diferentes formas de utilização da técnica de hibridação de ácidos nucleicos 6. O que significa, em biotecnologia, o acrônimo PCR? qual a aplicabilidade desta técnica? 7. Descreva um ciclo de PCR 8. Cite ao menos 5 aplicações diferentes da técnica de PCR 9. Em que consiste a técnica de…

Revista Brasileira de Zootecnia © 2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia ISSN impresso: 1516-3598 ISSN on-line: 1806-9290 www.sbz.org.br R. Bras. Zootec., v.36, suplemento especial, p.185-209, 2007 Estudos de expressão gênica utilizando-se microarrays: delineamento, análise, e aplicações na pesquisa zootécnica Guilherme Jordão de Magalhães Rosa1, Leonardo Bernardes da Rocha1,2, Luiz Roberto Furlan3 1 - Department of Dairy Science, University of Wisconsin, Madison – WI,…

http://www.ufrgs.br/seerbio/ojs/index.php/rbb/article/view/1268 RESUMO: A tecnologia de microarray é uma ferramenta de análise de expressão gênica que permite investigar a expressão de centenas ou milhares de genes em uma amostra com uma reação de hibridização. A tecnologia é baseada na hibridação de alvos marcados derivados de amostras biológicas e uma série de sondas de DNA imobilizadas em uma matriz sólida, que representam os genes de interesse. O estudo simultâneo de centenas de…

que auando marcr com a sonda, a mutação vai evitar a clivagem desteentão na hora que hibridizar o fragmento para essa região vai ser observdo uma banda maior em relação ao individuo saudável. - nem sempre uma mutação acontece em um sítio específico para uma enzima de restrição, tendo padrões de polimorfismos diferentes. Eletroforese com DNA desnaturado Desnatura-se tanto o dna normal, como o mutado com o hidróxido de sódio, pq quando o dna esta desnaturado a corrida vai dar uma…