Técnicas em Biologia Molecular FIOCRUZ

Técnicas Básicas de Biologia
Molecular
Diamar Costa-Pinto
FIOCRUZ

Visão da Apresentação
PCR
Bibliotecas genômica e de expressão
Fragmentação - digestão
Separação - eletroforese
Clonagem molecular
Sequênciamento

Southern, Northern e Western blotting

By Diamar

Diagnóstico do século 21
- Podemos fazer análises genômicas, pois a maioria dos cromossomo já estão mapeados. - O projeto genoma tem sido uma grande ferramenta para unir genomas e laboratório clínico.

Mapas Genéticos, Citológicos e
Físicos
EST – Sequências expressas marcadas. cDNA curtos que ligam mapas físicos a genéticos RFLP- Polimorfismo dos comprimentos dos fragmentos de restrição
By Diamar

Procurar um gene dentro de um genoma humano é comparável a procurar uma pessoa sem sobrenome em uma casa sem endereço em uma rua desconhecida em uma cidade não identificada de um país estrangeiro.
Solange Farah

By Diamar

Enzimas de Restrição
1953 – a eficiência de replicação de um bacteriófago dependia da célula hospedeira
Verificou-se, então, a presença de nucleases
Bactéria restringe o crescimento do fago e protege o seu DNA metilando-o (modificando)
Fenômeno chamado restrição/modificação
Advento das endonucleases de restrição
Sítio é normalmente uma palíndrome

By Diamar

Enzimas de Restrição
(continuação)

Palíndrome:
ARARA
ARARA
OMO
OMO
ANA
ANA
By Diamar

Enzimas de Restrição
(continuação)

Reconhecem seqüências de 4 a 8 pares de bases Cortes com extremidades abruptas ou coesivas
Primeira letra maiúscula é gênero e as duas outras minúsculas são espécies
1073 – foram usadas para clonagem molecular
Pode-se recombinar DNA humano com qualquer outra espécie
Fragmentos separados por eletroforese

By Diamar

Enzimas de Restrição
(continuação)

By Diamar

By Diamar

Vídeo de Enzima de
Restrição

By Diamar

Eletroforese
Já conhecida desde 1930
Difundida em 1950-1960
Movimentação de moléculas submetidas a
campo