Tipos especias de microscopia fotonica

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Trabalho de Biologia

Tipos especiais de microscopia fotônica

Introdução:

MICROSCOPIA FOTÓNICA
 
Os principais instrumentos, ainda que não os únicos, empregues no estudo das células e dos tecidos, são os microscópios. Existem basicamente duas famílias de microscópios empregues em biologia: os microscópios fotónicos e os microscópios eletrônicos.
Em biologia, a microscopia fotónicaconsiste num conjunto de técnicas sequenciais e complementares que visam não só a observação de células ou tecidos de seres vivos mas, também a preparação prévia desses materiais, e ainda a captura de imagens para posterior observação.

Microscópio fotônico comum
(ou de câmara clara)
 
O microscópio fotónico comum, também designado por microscópio de câmara clara, é um sistema óptico capaz defornecer, de um objeto, uma imagem ampliada, permitindo a observação de detalhes invisíveis a olho nu. É constituído basicamente por dois conjuntos de lentes: o conjunto objetiva e o conjunto ocular. A objetiva dá do objeto AB uma imagem real A'B', ampliada e invertida. A ampliação da objetiva, Aob , é dada pela fórmula :
Aob = A’B’/AB
A ampliação, é uma das características ópticas essenciais daobjetiva. A ocular, por sua vez, fornece de A’B’ uma imagem virtual A’’B’’ muito afastada, mas que, através do cristalino, se projecta na retina do globo ocular. A ampliação da ocular é função da distância focal (foc ) em milímetros:
Aoc = 250/foc
Entre outras, destacam-se, nos microscópios, três características principais: a ampliação, a abertura numérica e o poder de resolução.
 
 Microscópio fotónico e esquema óptico de formação de imagem
 
A ampliação A do microscópio é determinada a partir das ampliações da objetiva e da ocular:
A = Aob x Aoc
Habitualmente, os microscópios vêm equipados com diversas objetiva montadas sobre um tambor rotativo (ou revolver), o que permite mudar comodamente de ampliação no decurso do trabalho. Sendo que as oculares mais comuns possuem umaampliação de 10x e a objetiva de maior ampliação, é de 100x, a ampliação máxima habitual do microscópio fotónico raramente ultrapassa o limiar útil de 1000x .
 A abertura numérica AN da objetiva é dada pela fórmula:
AN = n. sen 
sendo n o índice de refração do meio que se interpõe entre o objeto AB e a lente e  , o ângulo que forma o raio mais externo captado pela lente frontal da objetiva.Habitualmente, o meio em contacto com a lente é o ar (n = 1). Porém, se substituir o ar por um líquido cujo índice de refração seja superior, pode obter-se um valor superior para a abertura numérica. Na prática, obtém-se este efeito imergindo a objetiva numa gota de óleo (óleo de imersão) cujo índice de refração é de 1,51. As melhores objetivas de imersão possuem uma abertura numérica que atinge 1,4 .O poder de resolução é a capacidade que o microscópio possui de distinguir dois pontos adjacentes. Na prática, o poder de resolução é expresso pelo limite de resolução , que é a menor distância que pode existir entre dois pontos para que apareçam individualizados. Em consequência, quanto menor for o limite de resolução da objetiva, maior será o respectivo poder de resolução.
 

Aberturas dasobjetivas
 
O limite de resolução é função da AN e do comprimento de onda médio da luz empregue na observação. Assim,  dado pela
fórmula:
 = 0,61 l n. sen 
 
Sendo a luz amarelo esverdeada ( = 570 nm) aquela para a qual o olho possui maior sensibilidade, e empregando uma objetiva de imersão, atinge-se um limite de resolução de 250 nm (e = 0,61 x 570 / 1,4 = 250 ).
Pode aindareduzir-se este limite, empregando uma iluminação ultravioleta, de comprimento de onda de 275 nm. As objetivas corrigidas para este comprimento de onda possuem todavia uma abertura numérica ligeiramente mais fraca (1,25); nestas condições, o limite de resolução diminui e baixa a 130 nm. Contudo, a imagem não podendo ser observada diretamente, é projetada numa emulsão fotográfica.
Do que foi dito se...
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