Teste gram

TESTE DE GRAM

1. INTRODUÇÃO

Para caracterização morfológica de bactérias, podemos observar microrganismos vivos, através de preparação a fresco, ou preparações em gota pendente, ou ainda microrganismos em esfregaços fixados e corados, sendo esta a utilizada no experimento. Através desta técnica as células são mais facilmente visualizadas após a coloração e ainda podemos observar diferenças entre células da mesma espécie ou de espécies diferentes. O esfregaço é constituído de uma camada muito fina de material (bactérias) sobre a lâmina. Para a fixação deste material podemos utilizar a ação do calor, álcool, formol, ácido acético e tem por objetivo imobilizar os constituintes celulares.
O método de coloração mais utilizado em estudos de microbiologia básica é o método de Gram. A coloração Gram é usada para diferenciar bactérias.
A coloração consiste na aplicação de diferentes substâncias que são elas um corante básico que é o cristal violeta e uma solução de iodo e iodeto de potássio (lugol), em um esfregaço fixado na chama. A seguir ocorre o tratamento com um solvente orgânico (álcool ou acetona), que tem o objetivo de descolorir as células As células que mesmo após a lavagem com o solvente orgânico mantém a coloração são denominadas Gram-positivas e as que não mantêm são denominadas Gram-negativas. As células sem coloração são tratadas com o corante fucsina ou safranina, chamado de corante de contraste adquirem a coloração vermelha.
No total são utilizados quatro corantes para realização do teste de Gram:
Gram I: cristal violeta, que penetra no interior das células.
Gram II: lugol. Ocorre a formação de um complexo cristal violeta+lugol no citoplasma.
Gram III: álcool+acetona. Quando é realizada a lavagem da lâmina para retirada do cristal violeta+lugol, retiramos junto os lipídeos da parede das bactérias Gram -, juntamente com os corantes.
Gram IV: fucsina que é o corante de contraste. Este será absorvido apenas por bactérias Gram-, já que toda a