Tecnicas de purificacao

Técnicas de Purificação

Maria Alice Zarur Coelho Priscilla Filomena Fonseca Amaral Programa de Pós-graduação em Tecnologia de Processos Químicos e Bioquímicos

Técnicas de Purificação
Introdução
• Meios de fermentação: - produtos extracelulares (solúveis e insolúveis), - produtos intracelulares, - fragmentos de células, - microrganismos intactos - substratos ou demais componentes não convertidos em produto. • Diversidade: métodos de separação passíveis de utilização é muito vasto. suspensão diluída processo de separação e/ou purificação

composto altamente purificado

• Quatro etapas similares, que ocorrem seqüencialmente: - remoção de material insolúvel Separação - separação dos produtos - purificação Purificação - polimento (geralmente associado a cristalização)

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Etapas de Recuperação
Separação • Operações Unitárias: - centrifugação Remoção de material insolúvel - filtração - adsorção, Separação de produtos - extração com solvente • Duas etapas vêm sendo combinadas em um único estágio; • Nota-se um grande aumento da concentração do produto nesta fase

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Etapas de Recuperação
Separação • Enzimas extracelulares: - Resfria-se o meio fermentado a 5°C (estabilidade e evitar contaminação) - pH ajustado • Fungos filamentosos: - centrifugação - ou filtração (filtro-prensa/ filtro rotativo a vácuo) • Leveduras e Bactérias: - prévia floculação (sulfato de alumínio, CaCl2) - centrifugação - ou filtração (filtro-prensa/ filtro rotativo a vácuo)

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Etapas de Recuperação
Separação • Enzimas hidrolíticas: centrifugação - bactérias gram-positivas tais como Bacillus subtilis (produtora da protease subtisilina) - bactérias gram-negativas como Klebsiella pneumoniae (produtora da pululanase): presença de membrana externa – complicações: liberação apenas parcial da enzima no meio.

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Etapas de Recuperação
Extração Enzima localizada na parte externa da membrana celular (mas não é