Purificação

Técnicas de Purificação

Maria Alice Zarur Coelho
Priscilla Filomena Fonseca Amaral
Programa de Pós-graduação em Tecnologia de Processos
Químicos e Bioquímicos

Técnicas de Purificação
Introdução
• Meios de fermentação:
- produtos extracelulares (solúveis e insolúveis),
- produtos intracelulares,
- fragmentos de células,
- microrganismos intactos
- substratos ou demais componentes não convertidos em produto.
• Diversidade: métodos de separação passíveis de utilização é muito vasto. suspensão diluída

processo de separação e/ou purificação

composto altamente purificado • Quatro etapas similares, que ocorrem seqüencialmente:
- remoção de material insolúvel
Separação
- separação dos produtos
- purificação
Purificação
- polimento (geralmente associado a cristalização)

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Etapas de Recuperação
Separação
• Operações Unitárias:
- centrifugação
Remoção de material insolúvel
- filtração
- adsorção,
Separação de produtos
- extração com solvente
• Duas etapas vêm sendo combinadas em um único estágio;
• Nota-se um grande aumento da concentração do produto nesta fase

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Etapas de Recuperação
Separação
• Enzimas extracelulares:
- Resfria-se o meio fermentado a 5°C (estabilidade e evitar contaminação)
- pH ajustado
• Fungos filamentosos: - centrifugação
- ou filtração (filtro-prensa/ filtro rotativo a vácuo)
• Leveduras e Bactérias: - prévia floculação (sulfato de alumínio, CaCl2)
- centrifugação
- ou filtração (filtro-prensa/ filtro rotativo a vácuo)

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Etapas de Recuperação
Separação
• Enzimas hidrolíticas: centrifugação
- bactérias gram-positivas tais como Bacillus subtilis (produtora da protease subtisilina)
- bactérias gram-negativas como Klebsiella pneumoniae (produtora da pululanase): presença de membrana externa – complicações: liberação apenas parcial da enzima no meio.

Técnicas de Purificação
Etapas de Recuperação
Extração
Enzima