Relatorio Bradford

DOSAGEM DE PROTEÍNA PELO MÉTODO DE BRADFORD

INTRODUÇÃO
As proteínas são macromoléculas biológicas formadas por uma ou mais cadeias de aminoácidos e a quantificação precisa das mesmas é essencial para todo tipo de experimento que trabalha com elas, em áreas como biologia molecular e celular, bioquímica, biologia do desenvolvimento e neurociências. Desde o século passado métodos de quantificação diferentes foram desenvolvidos, devido a sua ampla utilização. Neste caso a leitura dessas proteínas foram feitas através de absorbância por um aparelho de espectrofotometria chamado de “Leitor de Elisa” em conjunto com o procedimento desenvolvido por Marion Bradford, onde a quantificação das proteínas se dá pelo nível de radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substância.

OBJETIVO
Calcular a quantidade da proteína albumina do soro bovino (BSA) em uma amostra desconhecida através do método Bradford com espectrofotometria.

MATERIAIS, PROCEDIMENTOS E MÉTODO
Foi utilizado o método de Bradford, que se baseia na observação de que o azul brilhante de coomassie G-250 se converte da cor vermelha para azul após ligação à proteína. O complexo é formado rapidamente (2 minutos), permanece disperso em solução por um tempo relativamente longo (uma hora) e tem um alto coeficiente de extinção, o que permite grande sensibilidade na dosagem das proteínas.
Foram utilizados: Pipeta automática, placa de Elisa, leitor de Elisa, água destilada, corante azul de Comassie e BSA.
Procedimento:
Preparar os pontos de curva de proteína padrão (BSA) nas seguintes concentrações: 0 (branco), 40, 80, 160, 320 e 640 μg
Distribuir nos wells (poços) da placa de Elisa as diferentes concentrações da curva padrão em duplicata e as amostras de concentração proteica desconhecida (também em duplicata)
Acrescentar Bradford (azul de coomassie G em etanol 100%; ácido fosfórico 85% e agua miliQ).
Levar a placa de Elisa