Relat 3

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
FACULDADE DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS
TA514 - Bioquímica de Alimentos

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA Nº3

Aula Prática 03 - Determinação de Proteína pelos Métodos de Lowry, Biureto e Bradford

GRUPO 3:
Ana Flávia Barbarini RA: 134886
Giulia Falcirolli Gonçalves RA: 135909
Henrique Satriani RA: 136087

CAMPINAS, 2015
1. Introdução
As proteínas desempenham papéis extremamente importantes na maioria dos processos biológicos, atuando como enzimas, hormônios, neurotransmissores, transportadores através das membranas celulares e outros (GANONG, 1995 & DARNELL, 1990).
Os métodos para a determinação da concentração de proteínas totais são muito variados, no entanto, as metodologias mais utilizadas são as espectrofotométricas no ultra-violeta e no visível (UV-Vis) (ZAIA e LICHTIG, 1998).
Entre os métodos espectrofotométricos mais utilizados estão o de Biureto (GORNALL, 1949), o de Lowry (LOWRY, 1951) e o de Bradford (BRADFORD, 1976).
O método de Biureto baseia na reação do reativo do biureto, que é constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre em solução (ZAIA, 1998).
O cobre, em meio alcalino, reage com proteínas formando um complexo quadrado planar com a ligação peptídica. O produto de reação apresenta duas bandas de absorção, uma em 270 nm e outra em 540 nm.
Apesar de ser rápido, utilizar reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas (GORNALL, 1949), este método pode sofrer interferências de substâncias que possam reagir com o cobre e não é muito sensível, colocando-o em grande desvantagem, em relação a outras metodologias, e por isto tem sido, ao longo dos anos, substituído por métodos mais sensíveis.
O método de Lowry foi originalmente proposto por WU, em 1922, sendo esta a metodologia mais utilizada para a determinação de proteínas. O