reacao de polimerização em cadeia

Reação de Polimerização em Cadeia (PCR) – a máquina de copiar DNA

Reação em cadeia da polimerase ( Polymerase Chain Reaction - PCR), é un método de que se baseia na replicação de DNA (ácido desoxirribonucleico), em pouco tempo . Processo que ocorre em vitro ( sem o uso de um organismo vivobactéria ou leveduras) . Este método foi criado em 1993, foi prémio nobel em química.
Com a PCR, quantidades mínimas de material genético podem ser amplificadas milhões de vezes em poucas horas, permitindo a deteção rápida e fiável dos marcadores genéticos de doenças infeciosas, cancro ou doenças genéticas.
A PCR está formulado de acordo com o princípio natural de replicação de DNA, é um processo que decorre em três passos, que em conjunto formam um ciclo. Ocorre num termociclador (equipamento que controla e alterna automaticamente as temperaturas durante períodos de tempo programados para o numero apropriado de ciclos geralmente de 25 a 30 ciclos, sendo possível aumentar, em cada ciclo, duas vezes a concentração de DNA pré-existente), para tal ser concretizável, as DNA polimerases utilizadas deverão ser termoestáveis, isso só é conseguido com o isolamento da DNA polimerase da estirpe termofílica Thermus aquaticus (Taq DNA polimerase) que actua a temperaturas elevadas levando assim a um aumento da especificidade da reação.
De referir ainda que o produto de PCR pode ser visualizado após eletroforese em gel de agarose e o seu tamanho ser estimado por comparação com padrões lineares de DNA.

Assim, um ciclo de PCR consiste nos seguintes passos: 1. Desnaturação – esta fase ocorre a temperatura elevada (geralmente >90ºC) separa a cadeia dupla de ADN em dois filamentos as ligações de hidrogénio que, por serem relativamente fracas, quebram-se a altas temperaturas 2. Hibridização (O objetivo da PCR não é replicar a cadeia inteira de ADN, mas apenas replicar a sequência de interesse) Numa reação de PCR são incluídos dois primers, um para cada cadeia simples de ADN