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Medição da actividade de Desidrogenase em solos

Principio do método: As amostras de solo são suspensas numa solução de cloreto de trifeniltetrazol (TTC) e incubadas a 40ºC durante 24horas. O trifenil formazan (TPF) produzido é extraído com acetona e medido espectrofotometricamente a 546nm (modificado de Thalmann, 1968).

Reagentes: Acetone
Tris(hydroxymethyl)aminomethane
Hydrochloric acid
2,3,5-triphenultetrazolium chloride (TTC)
Triphenyl formazan (TPF)

Notas:
TTC e TPF são sensíveis à luz, o que se deve evitar a exposição ao longo do decorrer da reacção a actividade de desidrogenase não deve ser utilizada como medida de actividade biológica em solos anaeróbios (solos muito ricos em compostos ferrosos ou sulforetos que vão reduzir o TTC a TPF) esta técnica possui algumas limitações relacionadas com a disponibilidade do H e O gasosos; por este motivo é necessária uma padronização da metodologia para ser possível a comparação de resultados cor formada: rosa
Preparação das soluções:
Tampão Tris (0,1M)
- dissolver 12,11g de tris(hydroxymethyl)aminomethane em água destilada, num balão volumétrico de 1000ml, e ajustar pH com hydrochloric acid para: pH 7,8 para solos ácidos (pH 7)
Solução de substrato
- a concentração óptima da solução de substrato é entre 0,1 e 2% de TTC (w/v), e deve ser determinada para cada tipo de solo: solos arenosos, ligeiramente húmicos e com pouca argila: 0,1 – 0,5% (1-5g/L) TTC solos argilosos e ricos em humus: 0,6 – 1% (6-10g/L) TTC solos barrentos e ricos em humus: 1 – 2% (10-20g/L) TTC
- dissolver o TTC na solução de tampão tris apropriada (NOTA: a solução deve ser armazenada no escuro a 4ºC durante apenas 1 semana, no entanto é preferível fazer a solução sempre que necessário)
Solução stock padrão (10mg TPF/ml)
- dissolver 1g de triphenyl formazan (TPF) em acetone e perfazer até 100ml num balão volumétrico (NOTA: a solução deve ser armazenada a 4ºC numa garrafa escura)
Padrão (0,1mg TPF/ml)
- diluir