PCR (Reação em Cadeia da Polimerase)

Prof. Me. Ronaldo de Jesus Costa HYPERLINK [e-mail] [e-mail] Considerada uma tcnica de biologia molecular revolucionria, a reao em cadeia da polimerase (PCR Polymerase Chain Reaction) permitiu o rpido desenvolvimento do estudo de sequncias de cidos nuclicos. Desenvolvida por Kary Banks Mullis, em abril de 1983, essa tcnica de biologia molecular consiste em nada mais que a sntese enzimtica de cpias de cidos nuclicos em laboratrio. O cientista recebeu o prmio Nobel de qumica de 1993 por sua descoberta. A tcnica de biologia molecular por PCR promove, in vitro, por meio de artifcios de variao de temperatura, o que o organismo realiza naturalmente, em condies fisiolgicas a duplicao de cadeias de DNA, envolvendo nucleotdeos, sequncias iniciadoras (primers) e enzima polimerases. Assim, possvel a obteno de muitas cpias de uma sequncia especfica de cido nuclico, a partir de uma fita molde. O princpio da PCR envolve trs etapas bsicas por ciclo, estimuladas pelo calor, que so repetidas por vrias vezes, em ciclos - Abertura da fita de DNA que servir de molde, por desnaturao trmica (etapa com durao entre 30s e 1min a temperatura de 92-96C) - Pareamento de oligonucleotdeos sintticos, que funcionam como os iniciadores da reao de polimerizao, a cada uma das fitas do DNA molde, regio complementar da fita que sofrer a duplicao (durao de 30s a 1min a temperatura entre 58 e 65C) - Polimerizao, atravs de uma enzima polimerase, das novas fitas de DNA a partir de cada um dos iniciadores, utilizando cada um dos quatro dNTP como substrato da reao de polimerizao (durao entre 45s e 1min, a 72c). Cada ciclo repetido em torno de 60 vezes, e promove a amplificao da regio alvo determinada conforme afinidade das sequencias iniciadoras (primers). Assim, o iniciador reconhece, por complementaridade, o local de incio do local a ser amplificado, efetua a ligao e sinaliza para a polimerase o incio da sequencia a ser replicada. O grande problema inicial foi a