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https://pt.scribd.com/doc/14171715/Relatorio-aula-pratica-Eletroforese
08/05/2013
pdf text original BIOQUÍMICAAULA PRÁTICA:
Eletroforese
OBJETIVO:
Realizar eletroforese com soro sanguíneo humano (proteína Albumina)
INTRODUÇÃO TEÓRICA
Eletroforese em gel é uma técnica de separação demoleculas que envolve amigração de particulas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa Em alguns casos, o formato da moléculas também influi, pois algumas terão maior facilidade para migrar pelo gel.Aeletroforese normalmente é utilizada para separar proteinas e moléculas de dna e rna. Foi introduzida cientificamente em 1939 por A.Tiselius e A.E. Kabat com oobjetivo de separar partículas orgânicas.A utilização de eletroforese no uso da rotina laboratorial tem sido importante paradeterminar hemoglobinopatias e talassemias, auxílio diagnóstico para doençasespecíficas, por ex.: mieloma múltiplo, além de aplicação em lipidogramas, biologiamolecular e enzimopatias.Técnicas mais sensíveis, como é o caso da focalização isoelétrica permitem a separaçãode frações com excelente resolução.
Eletroforese em gel de agarose
Nesse caso, a agarose é utilizada como gel para a eletroforese. A agarose é um polissacarídeo, e forma uma rede que segura as moléculas durante a migração.Dependendo da concentração de agarose, têm-se uma diferença no gradiente deseparação. Para preparar um gel de agarose, simplesmente faz-se a mistura entre o pó deagarose e solução tampão (TBE). Após fundir, coloca-se brometo de etidio, que fará oDNA ou RNA "brilhar" quando exposto ao UV. Quando a mistura esfriar o gel estaráduro. Esse endurecimento é feito em um local apropriado, o mesmo local onde será feitaa corrida da amostra. Um detalhe importante é a colocação do pente no gel durante oendurecimento. O pente cria poços que serão utilizados para a colocação das