MICROBIOLOGIA TRAB

Coloração SIMPLES - AZUL de METILENO
Reagentes
Solução de azul de metileno:
- Solução alcoólica, saturada, de azul de metileno – 300 ml
- Solução aquosa, a 0,01% de hidróxido de potássio – 1000 ml
• Cobrir o esfregaço, correctamente fixado, com solução de azul de metileno durante 3 minutos. • Lavar com água corrente e secar
Coloração DIFERENCIAL - Método de GRAM
Reagentes
Solução de violeta cristal:
- violeta de cristal - 2 g
- álcool etílico a 95% - 20 ml
- oxalato de NH4 - 0.8 g
- água destilada - 100 ml
Lugol:
- iodeto de potássio – 2 g
- cristais de iodo – 1 g
- água destilada – 100 ml
Descorante (álcool-acetona):
- acetona - 50 ml
- álcool etílico a 95% - 50 ml
Contra-coloração:
- safranina O - 2.5 g
- álcool etílico a 95% - 100 ml
-Juntar 10 ml desta solução a 100 ml de água destilada • Cobrir o esfregaço já fixado, com solução de violeta de cristal durante 1 minuto.
• Lavar com lugol e deixar actuar durante 1 minuto.
• Lavar com água corrente.
• Descorar com álcool acetona até que não saia mais cor violeta do esfregaço.
• Lavar com água corrente
• Cobrir a superfície com solução de contra-coloração (safranina, fucsina diluída etc.) durante 1 minuto.
• Lavar com água corrente e deixar secar.
• As bactérias Gram positivo coram de roxo escuro e as Gram negativo de vermelho
Coloração para detecção de ÁCIDO ÁLCOOL RESISTÊNCIA
1. Coloração de ZIEHL- NEELSEN
Reagentes
Fucsina de Ziehl:
- fucsina básica em pó – 5 g
- fenol cristalizado – 25 g
- álcool absoluto – 50 ml
- água destilada – 500 ml
Colocar a fucsina e o fenol num balão e aquecer em banho de água fervente durante 5 min, com agitação frequente.
Depois de completa dissolução, adicionar álcool e agitar bem. Juntar, por fim, a água destilada e filtrar antes de usar.
Descorante:
- álcool etílico 95% - 97 ml
- ácido clorídrico concentrado (37%) – 3 ml
Azul de metileno (já descrito)
7
• Cobrir a lâmina com solução de fucsina e aquecer até à emissão de vapores. Deixar actuar durante 10 minutos.
• Lavar com água