isolamente de DNA

RELATÓRIO

UFT – Universidade Federal do Tocantins
Acadêmico: Daniel
Professores: Valdecio, Bernardo, Renilto, Ronaldo e Vanessa.
Local: Laboratório de Biotecnologia em Palmas - Tocantins

Relatório de aula prática

1. Introdução
A aula pratica de laboratório administrada dia 29/09/2012 trata-se da prática para extração e isolamente do DNA da folha da melissa officinalis.

2. Objetivo

Objetivo da aula prática é extrair e o isolar o DNA da planta Melissa officinalis.

3. Material e Métodos.

Logo embaixo os matérias e métodos utilizados durante a aula prática.
1. Macerar no cadinho 100mg de folhas previamente desidratadas em estufa a 70oC por 2 horas;

2. Coloque o material triturado em tubos de 2,0 mL

3. Adicionar ao tecido recém-macerado 1,0 mL de tampão de extração CTAB 3% e misturar ao vortex.

4. Incubar em banho-maria a 65°C, por 30 min., agitando a cada 10 min. para homogeneização.

5. Retirar do banho-maria, esperar esfriar e adicionar 600 µL de CIA (clorofórmico-álcool isoamalílico) 24:1 (576:24 µL). Agitar os tubos durante 5min. para obter uma emulsão homogênea.

6. Centrifugar por 5 min. a 13.500 rpm.

7. Retirar a fase aquosa superior cuidadosamente e transferir para um novo tubo.

8. Adicionar 1mL de isopropanol gelado.Misturar calmamente até os ácidos nucléicos precipitarem.
8.1. Observar formação de um precipitado esbranquiçado (DNA) em suspensão.

9. Centrifugar a 7.500 rpm por 3 mim. para formar pellet.

10. Derramar o sobrenadante, com cuidado.

11. Adicionar 1ml de etanol 70%, incubar de 5 a 10 min. e centrifugar por 3 min. a 7500 rpm.

12. Descartar o sobrenadante. Deixar o pellet secar.
13. Ressuspender o pellet em 100 µL de água destilada.

ELETROFORESE

Após a extração e isolamento do ácido desoxirribonucléico, 3,0μl do DNA foram misturados a 2,0μl do tampão de carregamento loading dye (12,5 mg de azul de bromofenol, 4,0 g de sacarose e 5,0 ml de água) foram