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Escola Superior de Saúde do Vale de Sousa
Licenciatura em Enfermagem 1º ano

Espectrofotometria
Determinação da concentração de proteína no plasma pelo método do Biureto
Bioquímica GeralOBJECTIVOS:

O objetivo deste trabalho é determinar a concentração de proteínas no plasma pelo método colorimétrico do biureto.
A reação do biureto funciona como indicador das ligações peptídicasexistentes, e esta só ocorre quando existem pelo menos três aminoácidos numa cadeia peptídica.
Estas cadeias peptídicas quando reagem com o CuSO4 na presença de NaOH dão origem a uma solução de corvioleta.
Das substâncias presentes em sistemas biológicos, as proteínas são geralmente as únicas que dão uma reação positiva, embora existam várias substâncias que interfiram na reação.
Recorre-se aeste método porque as proteínas não absorvem significativamente na região do visível do espectro, mas formam um complexo corado quando reagem com o reagente do biureto, o que permite efectuar facilmentea sua quantificação, utilizando um espectrofotómetro vulgar.

RESULTADOS
Tabela 1: Valores da densidade óptica (D.O.) dos tubos de 1 a 8 para a construção da recta padrão e determinação da massadas proteínas dos tubos 5 a 8.
Tubo
Albumina 0,4% (m/v)/ml | D.O (densidade otica)
(540nm)
| mproteina
(calculada /mg) |
1 | 0 | 0 |
2 | 0,077 | 2 |
3 | 0,163 | 4 |
4 | 0,322 | 8 |Tabela 2: Determinação da massa das proteínas dos tubos 5 a 8.
Tubo
Plasma diluído 10X/ml | D.O (densidade otica)
(540nm)
| mproteina
(calculada /mg) |
5 | 0,129 | 3,22 |
6 | 0,130 | 3,24|
7 | 0,250 | 6,21 |
8 | 0,248 | 6,16 |

Gráfico 1: Recta padrão obtida da densidade óptica versus quantidade de proteínas para os tubos de 1 a 4 a 540 nm. (para determinação do declive eposteriormente para calcular concentração de proteínas nos tubos de 5 a 8). Em anexo será colocado o gráfico em papel milimétrico.
CÁLCULOS
Cálculo da concentração de proteínas dos tubos 5 a 8 usando o...
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