Extracao e purificacao de plasmideos

Extração e purificação de plasmídeos

Introdução

Os plasmídeos em procariotos, ou epissomos em eucariotos, são moléculas de DNA circular com capacidade de replicação independente e estável, mantendo seu número constante através de várias gerações, no estado não integrado ao cromossomo do hospedeiro. Os plasmídeos estringentes ocorrem em pequeno número de cópias por células, enquanto os relaxados em grande número de cópias por célula. Apesar de não serem indispensáveis à vida das células, em determinadas situações os plasmídeos podem conferir-lhes propriedades essenciais à sobrevivência. Eles são responsáveis por inúmeros casos de resistência múltipla a drogas em bactérias e pela estabilidade de importantes microorganismos utilizados na indústria. Genes plasmidiais controlam a codificação de importantes enzimas envolvidas em diferentes etapas da industrialização do leite e do vinho. Os plasmídeos são dependentes da DNA-polimerase ( que duplica o DNA ), da RNA-polimerase (que copia as informações contidas no DNA ) e da maquinaria de tradução ( síntese de proteínas ) da célula hospedeira . Devido a sua habilidade de replicação independente e recombinação gênica os plasmídeos são amplamente utilizados em estudos de engenharia genética e biologia molecular como vetores de genes e/ou fragmentos de DNA dos quais se queira saber as sequências de bases ou as sequências de aminoácidos. Ao ser inserido no plasmídeo o fragmento passa também se replicar seguindo as divisões celulares e com isso aumentando exponencialmente seu número, fornecendo material suficente para expressão, sequenciamento e manipulação gênica do frgmento. As técnicas de DNA recombinante permitem a construção de plasmídeos artificiais, nos quais sabe-se exatamente onde se liga o fragmento de interesse. Esses plasmídeos artificiais são usados, por exemplo, para a produção de insulina em bactérias. Por todas estas vantagem a utilização de plasmídeos é de grande interesse. Entretanto para