Espectrofotometro

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  • Publicado : 1 de novembro de 2012
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Introdução
A Espectrofotometria é uma técnica amplamente utilizada em laboratórios para investigações biológicas e físico-químicas. Esta técnica tem suas aplicações em diversas áreas como na bioquímica, física, química e biologia molecular.
Sua utilização visa identificar e determinar a concentração de substancias que absorvem energias radiantes, em um solvente. O espectrofotômetro compara aradiação transmitida ou absorvida por uma determinada solução, estas soluções apresentam uma quantidade desconhecida de soluto e uma quantidade conhecida da mesma substancia.

ESPECTROFOTÔMETRO
É um aparelho que permite comparar radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substância, ou seja, ele é usadopara medir a concentração de substâncias, que absorvem energia radiante, em um solvente. Essa técnica é utilizada na quantificação direta de pequenas moléculas orgânicas e inorgânicas, de macromoléculas como proteínas e ácidos nucleicos ou na quantificação indireta de espécies inorgânicas e orgânicas através da titulação de indicadores cromogênicos e/ou reagentes específicos.

APLICAÇÕESCientifico e tecnológico, esse aparelho possui uma gama de aplicações e está presente em várias áreas, ele é utilizado em laboratórios de análises e pesquisas químicas, físicas, biológicas, bioquímicas, farmacológicas, etc.
COMO FUNCIONA?
Os métodos espectroscópicos baseiam-se na absorção e/ou emissão de radiação eletromagnética por muitas moléculas. Em geral um espectrofotômetro possui umafonte estável de energia radiante (normalmente uma lâmpada incandescente), um seletor de faixa espectral (monocromatizadores como os prismas, que seleciona o comprimento de onda da luz que passa através da solução teste), um recipiente para colocar a amostra a ser analisada (a amostra deve estar em recipientes apropriados como as cubetas e tubos de ensaio) e, um detector de radiação, que permite umamedida relativa da intensidade da luz. O intuito é passar um feixe de luz através da amostra e fazer a medição da intensidade da luz que atinge o detector. Quando a luz atravessa uma substancia, parte da energia é absorvida (absorbância), a energia radiante não pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das substâncias se deve a absorção (transmitância) de certos comprimentos de ondasda luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas não absorvidos. Através do prisma o aparelho separa a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda (tal, como acontece no arco-íris com a separação das cores da luz branca). Pode-se assim fazer passar através da amostra um feixe de luz monocromática (de um único comprimento de onda,ou quase). Ou seja, o aparelho controla o comprimento da onda da luz incidente na amostra e indica a razão entre a intensidade da luz que incidiu e a luz que conseguiu, de fato, atravessar a amostra.
Obs.: É muito importante ao colocar a amostra a ser analisada, não tocar no tubo de ensaio na parte do meio, para evitar manchas de dedo que alteram a leitura do aparelho. Assim, o ideal é pegar naparte superior do tudo e coloca-lo no aparelho para que ele faça a leitura e dê o resultado almejado. Além disso, para que um espectrofotômetro funcione corretamente, deve ser aquecido antes de usar. Muitos dispositivos demoram cerca de 10 minutos para aquecer.
Transmitância: se passarmos um feixe de luz de intensidade conhecida através de uma amostra e medirmos a intensidade da luz queemergiu, podemos calcular a transmitância.
Absorbância:
uma vez que essa diferença de energia é única para cada espécie, um estudo das frequências da radiação absorvida fornece um meio de identificar os constituintes de uma amostra de matéria. Para isso determina-se experimentalmente um gráfico de absorbância em função do comprimento de onda, ou da frequência.
Relação entre as duas: existe uma...
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