Espectrofotometria

A espectrofotometria é o método de análise optico mais usado nas investigações biológicas e físico-químicas. O espectrofotômetro é o instrumento que permite comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substância. É uma das mais valiosas técnicas analíticas amplamente utilizadas em laboratórios de área básica, bem como em análises clínicas. Por meio da espectrofotometria, componentes desconhecidos de uma solução podem ser identificados por seus espectros característicos ao ultravioleta, visível, ou infravermelho.
O conhecimento da absorção de luz pela matéria é a forma mais usual de determinar a concentração de compostos presentes em solução. A maioria dos métodos utilizados em bioquímica clínica envolve a determinação espectrofotométrica de compostos corados obtidos pela reação entre o composto a ser analisado e o reagente originando um produto colorido. Os métodos que se baseiam nesse princípio são denominados métodos colorimétricos, os quais geralmente são específicos e muito sensíveis. A grande vantagem em utilizar compostos coloridos deve-se ao fato de eles absorverem luz visível.
A absorbância das radiações ultravioleta e infravermelho dependendo das estruturas das moléculas é uma característica para cada substância. A absorbância é a capacidade intrínseca dos materiais em absorver radiação em frequência específica.
Quando um feixe de luz monocromática atravessa uma solução com moléculas absorventes, parte da luz é absorvida pela solução e o restante é transmitido. A absorção de luz depende basicamente da concentração das moléculas absorventes e da espessura da solução

SOLUÇÕES BRANCAS E TRANSPARENTES: refletem toda a luz que incide sobre elas, as transparentes, transmitem toda a luz que incide sobre elas. SOLUÇÕES PRETAS: absorvem toda luz que incide sobre elas. SOLUÇÕES COLORIDAS: absorvem luz em uma determinada faixa de comprimento de onda