Enterocolite bacteriana

Disponível somente no TrabalhosFeitos
  • Páginas : 6 (1379 palavras )
  • Download(s) : 0
  • Publicado : 5 de novembro de 2012
Ler documento completo
Amostra do texto
CLONAGEM MOLECULAR E TRANSFORMAÇÃO BACTERIANA
I - INTRODUÇÃO
Atualmente é muito comum ouvirmos falar de clonagem em meios de
comunicação que atingem o grande público. É também bastante comum
assistirmos a discussões sobre ética e importância da clonagem entre pessoas
que pouco sabem sobre a parte técnica do que estão discutindo e, muitas
vezes, também sabem pouco sobre os objetivos dospesquisadores com os
experimentos que são mostrados de forma sensacionalista na mídia. Esta
situação acaba dificultando o julgamento final: quem clona é do Bem ou do
Mal?
O termo clonagem pode ser entendido como o processo de fazer cópias exatas
de um organismo ou de qualquer elemento. Portanto, quando dizemos que a
ovelha Dolly é um clone, queremos dizer que ela é uma cópia exata de outraovelha.
Para obter este tipo de cópia, a clonagem é iniciada com células e, por esta
razão, é chamada clonagem celular.
O caso que vamos examinar, não consiste em fazer cópias de uma célula, mas
de uma molécula em particular. A clonagem de uma molécula (e não mais uma
célula ou um organismo) é chamada clonagem molecular, assunto deste texto.
A molécula a ser clonada é uma molécula de DNA. Alémdisto, o termo é
utilizado, neste caso, não mais para se referir a todo o processo de cópia da
molécula, mas apenas à etapa inicial de ligação do inserto no vetor. Vetor?
Inserto? Ligação? Vamos por etapas.
Vetores são moléculas de DNA plasmidial (plasmídios) dupla-fita, circular, que
têm replicação independente da do DNA genômico da bactéria. Os plasmídios
são passados de geração parageração e podem ser facilmente introduzidos
em bactérias que não os contenham. Logo, se “grudarmos” um fragmento de
DNA (como, por exemplo, o gene que contém a informação para produção de
insulina), em um vetor e o introduzirmos na bactéria, o gene da insulina
passará a ser copiado cada vez que o vetor é replicado. Os pesquisadores
chamam os fragmentos específicos de genes de insertos e o processo de“grudar” o inserto em vetores, de ligação. O vetor que contém um inserto é
chamado de vetor recombinante, ou então de construção, e o processo de
introduzir o vetor recombinante na bactéria, para que ela o copie, é chamado
de transformação bacteriana.
II – CLONAGEM MOLECULAR
Antes de clonarmos um gene, temos que obtê-lo em quantidade suficiente para
realizar o processo de ligá-lo ao vetor.Para a obtenção precisamos ter
informações sobre este gene: sua seqüência de nucleotídeos, organismos que
o contenham e tecidos em que é encontrado. A obtenção do gene ou do cDNA
de interesse (o nosso inserto) pode ser feita por PCR, RT-PCR ou outras
técnicas equivalentes, que são determinadas de acordo com o material de
partida com o qual estamos trabalhando. Se o material de partida é DNApodemos utilizar PCR; se é RNA, temos que usar RT-PCR.
Às vezes clonamos genes com a intenção de expressá-los em um organismo.
Expressar um gene significa produzir a proteína que ele codifica. Quando
estamos trabalhando com genes de eucariotos e a intenção é utilizar estes
genes para serem expressos em bactérias, temos que levar em conta que
estas, como procariotos, não são capazes dedistinguir exons de introns. Esta
incapacidade leva as bactérias a produzir uma proteína errada quando há
introns presentes no gene que pretendemos expressar. Nestes casos, o
problema pode ser contornado clonando o cDNA e não o gene inteiro. cDNA é
uma seqüência de DNA obtida de uma polimerização utilizando RNAm como
molde e que, portanto, contém somente os desoxirribonucleotídios
correspondentesaos exons.
Após a obtenção do inserto, temos que ter em mãos o vetor já pronto para a
clonagem. Os vetores são plasmídios que recebem este nome porque
transportam o inserto para dentro da bactéria. Na verdade, os vetores são
plasmídios modificados pelos cientistas para maximizar suas possibilidades de
uso como ferramenta de Engenharia Genética. Aos plasmídios foram
adicionados alguns...
tracking img