Deteção de Apoptose em Células Sanguíneas

Deteção de apoptose em células sanguíneas
A homeostasia do tecidos é mantida através de um equilíbrio entre a proliferação celular e a morte celular, quer seja esta provocada por factores externos ou programada pela própria célula, como é o caso da apoptose. Este processo caracteriza-se por alterações morfológicas na membrana plasmática.
A translocação da fosfatidilserina do lado interno da membrana plasmática para a camada exterior é uma das mudanças estruturais que ocorre, sendo reconhecida pelos fagócitos. A anexina V é uma proteína de ligação a fosfolipídos e, na presença de iões cálcio, ela apresenta alta afinidade para a ligação seletiva à fosfatidilserina
(presente na camada interna da membrana). Anexina V mostra baixa afinidade para alguns fosfolipídos como a esfingomielina e a fosfatidilcolina. Estes dois fosfolípidos pertencem à camada externa e, desta forma, quando a célula está viva, a anexina não consegue atuar.
Este processo de detecção de apoptose em células sanguíneas baseia se, portanto, na afinidade de ligação da anexina V com a fosfatidilserina. Por isso, esta proteína pode ser utilizada como uma sonda sensível para a exposição de fosfatidilserina sobre a membrana celular. A sua translocação para a superfície externa da célula não é única para a apoptose, mas também ocorre durante a necrose. A diferença entre estas duas formas de morte celular é que na apoptose a membrana da célula mantém-se intacta, enquanto que na necrose esta perde a sua integridade e torna se permeável.
Portanto, o uso da anexina V como indicador da apoptose tem de ser complementado com o uso de um corante de exclusao, o iodeto de propidio para estabelecer a integridade da membrana celular.
Por exemplo, para detecao de apoptose nos linfócitos humanos, podem ser avaliadas células não tratadas e tratadas através de microscopia, por medição da quantidade de células apoptoticas usando citometria de fluxo de ADN e por electroforese de ADN para determinar