cultura de células e tecidos

Trabalho Prático nº1
a) De que material e condições precisa para fazer uma inoculação em caixa de
Petri de amostras de superfícies ou de uma amostra de água?
Para fazer uma inoculação em caixa de Petri, tendo em conta a experiência realizada nas aulas de CCT, é necessário placas de Petri com meio de cultura, amostras de água, micropipetas e pontas, espalhador, zaragatoas esterilizadas, tubos Eppendorf com soluto de Ringuer esterilizados, marcador, câmara de fluxo (e acessórios), incubadora/câmara de cultura, Álcool.
É necessário também condições de assepsia e em alguns casos trabalhar à chama dentro da câmara de Fluxo.
b) Quais os procedimentos necessários e cuidados a ter para realizar uma
Esterilização?
A utilização de calor em ambiente húmido é um dos métodos mais eficazes de destruição de microrganismos.
A morte das células microbianas por ação do calor húmido resulta da desnaturação das proteínas e da destabilização da membrana citoplasmática. Ocorre quando as células são sujeitas a temperaturas superiores à temperatura máxima de crescimento dos microrganismos em causa.
A esterilização por calor húmido é efetuada em autoclave, que consiste numa câmara com vapor de água saturado à pressão de 1 atm acima da pressão atmosférica, a que corresponde, em locais ao nível do mar, uma temperatura de ebulição da água de 121ºC.
Em laboratório, é usual sujeitar o material a esterilizar a 121ºC (1 atm; pressão relativa) durante 15 minutos, de modo a assegurar a morte de todas as formas de vida microbianas, incluindo a dos endósporos bacterianos, mais resistentes ao calor que as células vegetativas. Contudo, o tempo necessário para se esterilizar convenientemente os materiais, a esta temperatura, depende da natureza do material a esterilizar e/ou do seu volume.
O calor húmido sob pressão é utilizado na esterilização de meios de cultura que não contenham componentes termolábeis e na esterilização de material de plástico e de vidro a utilizar nos