Concentraçao

Realizou-se um experimento colocando em cada tubo as seguintes substâncias: Tubos

Reagentes (mL)
1
2
3
4
5
6

Solução padrão de proteína (5mg/mL)
-
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0

Água destilada
1,0
0,8
0,6
0,2
0,2
-

Reagente de Biureto
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0

Com o objetivo de aprender a construir curvas de concentração padrão realizou-se em laboratório de informática a seguinte hipótese. Tendo as absorbâncias padrões (hipotéticas) foi possível construir a curva de concentração padrão:

Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
Tubo 6
Concentração mg/mL
0,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
Absorbância (nm)
0,000
0,07
0,15
0,23
0,31
0,39

Calculou-se a concentração através da fórmula:
Ci x Vi = Cf x Vf

Após preparar as soluções citadas acima se utilizou espectrofotometria para determinar a concentração de proteína numa solução, através da medida da luz absorvida em comprimentos de onda. Utilizou-se o espectrofotômetro em 540 nm. Os resultados adquiridos foram os seguintes:
TUBOS
1
2
3
4
5
6
Absorbância branco 0,033
0,032
0,073
0,141
0,151

Através desta técnica pode-se fazer uma relação quantitativa de acordo com duas leis:
“Lei de Lambert: quando um feixe de luz passa através de um meio absorvente (sólido ou líquido), porções iguais deste meio irão absorver luz.” (DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA – UFPR, 2002)
“Lei de Beer: a absorção da luz é proporcional à concentração do soluto na solução.” (DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA – UFPR, 2002)
Assim, a partir das absorbâncias adquiridas foi possível determinar a concentração de proteína de cada solução:
TUBOS
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
Tubo 6
CD = Cp/Ap . AD
C2 = 5/0,151 . 0,033
C3 = 5/0,151 . 0,032
C4 = 5/0,151 . 0,073
C5 = 5/0,151 . 0,141
C6 = 5/0,151 . 0,151
RESULTADO mg/ mL
1,093
1,06
2,417
4,669
5

A concentração padrão da proteína utilizada foi 5 mg/mL, a absorbância padrão é a do tubo 6 visto que este não foi misturado com água