Coloração Gram - Microbiologia

Coloração de Gram

Introdução:

A coloração de Gram é um método de coloração de bactérias que consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, e fucsina básica. Essa técnica permite a separação de amostras bacterianas em Gram-positivas e Gram-negativas e a determinação da morfologia e do tamanho das amostras analisadas. O método da coloração de Gram é baseado na capacidade das paredes celulares de bactérias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactérias Gram-negativas não o fazem.

Objetivos:

Desenvolver habilidades para executar as técnicas de preparação de esfregaços e para método de coloração de Gram, sabendo diferenciar e classificar as bactérias de acordo com a coloração obtida e relacionando-as à composição química da parede celular das mesmas.

Materiais utilizados:

1-PBS

2- Uma ponteira raspar um pouco da Bactéria e misturar na lâmina

3- Lâmina

4- Lugol

5- Fucsina

6- Staphylococcus aureus.

Procedimento Experimental de Determinação de Gram:

Manuseando na área de segurança, pingamos o PBS (uma gota) na lâmina que vai ao microscópio. Com a ponteira, abrimos a placa de petri e retiramos com a ponteira superficialmente uma finíssima camada de microrganismos que ali cresceram;

tampamos novamente a placa e realizamos um esfregaço desta camada na lâmina que contem a PBS. Depois disso é necessário esperar até que a lâmina seque.

Após a secagem foi realizado o processo de coloração; para corar devem-se realizar os seguintes passos:

iii) Pingar o cristal violeta na lâmina 1 minuto

iv) Lavar

v) Pingar o lugol;

vi) Lavar

vii) Descorar rapidamente e lavar

viii) Pingar a fucsina = 30 segundos a 1 minuto

Depois de colocar a fucsina, lavamos novamente e secamos bem. Colocamos a placa no microscópio para visualização do resultado.