coloracao de gram

Introdução: Proposta por C. Gram em 1884, esta técnica permite distinguir células bacterianas quanto à composição das suas paredes celulares, facilitando a observação morfológica das próprias células. Em termos físico-químicos, o processo baseia-se na reação de um corante alcalino com os ácidos da célula. Por adição de lugol (solução de iodo) forma-se um complexo que, quando se aplica o álcool, desaparece ou é retido, consoante a diferente sensibilidade das paredes celulares. Torna-se assim possível distinguir entre bactérias Gram positivas (Gram +) e Gram negativas (Gram -), consoante a cor final que as células tomam. Esta coloração é um dos critérios fundamentais usados em taxonomia bacteriana, pois esta diferença de comportamento é atribuída a diferenças na composição da parede celular.
Procedimento da coloração para todos os métodos:
• Cobriu-se o esfregaço com cristal violeta durante 1 minuto;
• Lavou-se com água corrente (somente um fio de água) evitando incidir o jato diretamente sobre o esfregaço;
• Cobriu-se com lugol durante 1 minuto;
• Repetiu-se a lavagem;
• Descorou-se com álcool/acetona(gotejou-se a solução até que não saia mais o corante);
• Repetiu-se a lavagem;
• Cobriu-se com fucsina durante 30 segundos;
• Repetiu-se a lavagem;
• Esperou-se a lâmina secar naturalmente ao ar livre.
Objetivo: Demonstrar a importância da coloração de Gram e estabelecer a distinção entre:
• Bactérias Gram-positivas e Gram-negativas;
• As morfologias cocos, bacilos;
• Arranjos bacterianos (estafilococos, estreptococos, etc.;
• Leveduras.
Materiais:
- Lâminas,placas de petri, vidro de relógio, cadinho, pistilo, pisseta, béquer, água destilada, óleo de imersao, frasco com álcool/areia, alça bacteriológica, microscópio óptico, bico de bunsen, balança analítica, capela, luvas.
- Solução de cristal violeta, lugol, álcool/acetona, fucsina.
- Activia(bifidobacterium animalis), caldo de cana, yakult, placa sem nome, placa do tanque de peixes.
Microscopia: