Coloracao de gram

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Relatório número 1: COLORAÇÃO DE GRAM Disciplina: Agentes agressores e de defesa 02 de fevereiro de 2013

1. Resumo O presente trabalho tem o objetivo de identificar, através da coloração de Gram, o tipo de bactéria e a diferença da estrutura da parede bacteriana, principalmente com relação à espessura da camada de peptídeoglicano, que é responsável pelos diferentes comportamentos das bactériasdiante a coloração de Gram. Foram realizados dois experimentos com amostras de bactéria Proteus mirabilis e através do microscópio óptico foram comparadas entre si, identificando se as mesmas eram gram-positivas ou gram-negativas e verificando que a técnica, apesar de antiga, é fundamental e muito utilizada atualmente, como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia. 2. Introdução Acoloração de Gram é uma técnica de coloração bastante útil para classificar e distinguir os dois principais grupos de bactérias, as gram-positivas e gram-negativas. Desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista Hans Christian Gram, o procedimento baseado na diferença de constituição da parede celular de bactérias gram-positivas e gram-negativas consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano,fixado pelo calor, com os reagentes, cristal violeta, lugol, etanol-acetona e fucsina básica. Além da distinção dos dois grupos citados, determina a morfologia e o tamanho das amostras bacterianas analisadas. (TORTORA, 2005) Os diferentes tipos de bactérias reagem de diferentes maneiras à coloração de Gram. Na gram-positiva, o corante púrpura e o iodo se combinam

no citoplasma de cada bactéria,deixando-a violeta escura ou púrpura. As que perdem esta coloração são classificadas como gram-negativas e por serem incolores, utiliza-se o corante básico safranina a fim de tingi-las de rosa. O mecanismo de coloração de Gram sofreu diversas modificações ao longo dos anos, porém sem afetar substancialmente a ideia original. As bactérias apresentam externamente à membrana plasmática, uma parececelular de estrutura rígida, responsável pela forma da célula bacteriana que age de maneira seletiva e permeável, além de proteger contra choques osmóticos. Conforme a figura 1, as bactérias gram-positivas possuem uma parede celular mais espessa comparada às bactérias gram-negativas e estas contêm uma camada de lipopolissacarídeo como parte da sua parece celular. Quando lavadas com álcool, estacamada externa é rompida e por isso tornamse incolores, até que sejam contracoradas com a safranina para adquirirem a cor rosa (ROMEIRO, 1995)

Figura 1: Diferenças da parede celular em bactérias gram-positivas e gram-negativas. Fonte: http://microbiologiaonlineblog.blogspot.com.br/2010/12/microbiologia-onlinecom-foco-em.html

3. Materiais e Métodos A aula prática realizou-se no laboratório deMicrobiologia na Pontifica Universidade Católica do Paraná – PUC, no dia 23 de fevereiro de 2013. Para o experimento 1 e experimento 2 foram realizados os mesmos procedimentos descritos pelas etapas da coloração de Gram. Nesta ocasião, experimentalmente fez-se um esfregaço fino e homogêneo oriundas das colônias de Proteus Mirabilis. Para realização do esfregaço usou-se alça em anel estéril,colocou-se 2 ou 3 alíquotas de bactéria preparada em meio líquido sobre a superfície de uma lâmina, fazendo movimentos circulares de dentro para fora. Flambou-se a alça e deixou o esfregaço secar em temperatura ambiente. Em seguida, realizou-se a fixação, passando 10 vezes a lâmina rapidamente sobre o bico de Bunsen. De acordo com a figura 2, o esfregaço fixado pelo calor foi recoberto com um corantebásico púrpura, violeta de genciana, por 1 minuto. Uma vez que a coloração púrpura impregna todas as células é chamada de coloração primária, sendo que todas as células são coradas de roxo neste primeiro momento. (RIBEIRO; SOARES, 2005) Depois de lavado o primeiro corante, o esfregaço foi coberto por solução de lugol pelo período de 1 minuto e posteriormente foi lavado com água destilada. Ambas as...
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