CITOMETRIA DE FLUXO

Métodos em Biotecnologia - Citometria de Fluxo II

Citometria de fluxo - Funcionalidade celular on-line em bioprocessos Teresa Lopes da Silva1, Alberto Reis1, Christopher Hewitt2 e José Carlos Roseiro1
1 Instituto Nacional e Engenharia e Tecnologia Industrial - Departamento de Biotecnologia, Estrada do Paço do
Lumiar, 1649-038, Lisboa Codex - Portugal, E-mail: [e-mail]
2 Biochemial Engineering - School of Engineering (Chemical Engineering), The University of Birmingham,
Edgbaston, B15 2TT, UK.

Introdução
A necessidade de se obter informação no decorrer dos bioprocessos, tem contribuído para o aparecimento e utilização de uma grande diversidade de técnicas e ferramentas concebidas para o efeito. Os dados obtidos não só têm permitido aprofundar o conhecimento dos processos, como também o desenvolvimento de novas estratégias.
Um citómetro de fluxo é um sistema constituído por 5 elementos: fonte(s) de radiação, (lâmpada de mercúrio ou laser), uma câmara de fluxo, unidades de filtros ópticos para selecção de um intervalo de comprimento de onda específico a partir duma gama espectral mais vasta, fotodíodos ou fotomultiplicadores para a detecção sensível e processamento dos sinais com interesse e uma unidade que processa os dados recolhidos (Figura 1). A suspensão celular é injectada e atravessa a câmara onde se dá a passagem célula a célula através do feixe de radiação, perpendicular ao fluxo. A passagem individual das células é obtida através da focagem hidrodinâmica do fluxo de amostra, sendo esta injectada no seio de uma solução salina (sheath fluid) que também atravessa a câmara (Figura 2).
A diferença de velocidades entre os dois fluidos faz com que o fluxo se processe em regime laminar. A velocidade de escoamento da solução de revestimento (sheath fluid) é superior à da amostra, e ajustável, o que permite reduzir e controlar a espessura da solução da amostra de forma a que possa passar uma célula de cada vez. Desta forma, podem detectar-se até