biomedicina

ATIVIDADE ENZIMATICA - EFEITO DO Ph

1) QUAL A ENZIMA ANALISADA NA PRÁTICA?
Invertase
2) QUAL O SUSTRATO UTILIZADO? sacarose (glicose+frutose)
3) DISCORRA SOBRE A METODOLOGIA.
Estudou-se o comportamento da enzima invertase em soluções com diferentes concentrações de sacarose e o efeito do pH sobre a reação.

Foi utilizados 08 tubos de ensaio numerados de 01 à 08 sendo que foi deixado um tubo em branco, que não foi adicionado enzima e que foi utilizado para zerar o equipamento espectrofotômetro. Nos tubos de 02 à 08 foi adicionado solução tampão em diferentes pHs, variando de 02 a 09. sendo:

TUBO 01 - Tampão pH 2 - tubo branco - sem enzima;
TUBO 02 - Tampão pH 2
TUBO 03 - Tampão pH 4
TUBO 04 - Tampão pH 5
TUBO 05 - Tampão pH 6
TUBO 06 - Tampão pH 7
TUBO 07 - Tampão pH 8
TUBO 08 - Tampão pH 9

Foi adicionado 1 ml de água destilada no tubo 1 e 800 μL nos tubos de 02 à 08, após adicionar a agua destilada, foi adicionada 500 microlitros do substrato que é a sacarose em todos os tubos .
Apos a adicionada a sacarose foi adicionada 200 microlitros da proteína invertase e deixou descansar por 05 minutos.
Passado os 05 minutos de pausa, foi adicionado 1 ml de reagente ADNS em cada um dos tubos, após adicionado o ADNS os tubos foram colocados em banho maria a uma temperatura de 100 graus por 05 minutos para que a reação se desenvolva.
Passado os 05 minutos os tubos foram retirados do banho maria e foi feita a diluição adicionando 6,5 ml de água destilada. Feita a diluição de todas as amostras foi colocado para resfriar e posteriormente fazer a dosagem no espectrofotômetro, onde será efetuada a leitura.

Foi transferida 01 ml para cada cubeta para realizar a leitura no espectrofotômetro. O tubo de número 01 corresponde a reação que foi feita na ausência de enzima, o qual será utilizado para a calibragem do espectrofotômetro, que esta regulado a 540 nm.

4) COMO O PH PODE INTERFERIR NA ATIVIDADE ENZIMATICA?

O pH influencia