TÉCNICAS DE COLORAÇÃO DE GRAM

INTRODUÇÃO
O método de Gram é uma das mais importantes técnicas de coloração na microbiologia medica. Porem, os resultados da coloração de Gram não é universalmente aplicável, pois algumas células bacterianas coram-se fracamente ou não adquirem cor. A reação de Gram e mais consistente quando utilizada em bactérias jovens, em crescimento.
A reação de Gram de uma bactéria pode fornecer informações valiosas para o tratamento de doenças. As bactérias gram-positivas tendem a ser mortas mais facilmente por penicilinas e cefalosporinas. As bactérias gram-negativas geralmente são mais resistentes porque os antibióticos não podem penetrar a camada de lipopolissacarideo. Parte da resistência a estes antibióticos entre ambas as bactérias gram-positivas e gram- negativas é devido à inativação bacteriana dos antibióticos.
O mecanismo da coloração de Gram tem como base as diferenças nas estruturas da parede celular das bactérias gram-positivas e gram-negativas e como cada uma dessas estruturas reage aos vários reagentes (substancias utilizadas para produzir uma reação química). Cristal violeta, o corante primário, cora as células gram-positivas e gram-negativas de purpura, pois penetra no citoplasma de ambos os tipos celulares.
Quando o lugol, solução iodo-iodetada (o mordente), e aplicado, forma cristais com o corante que são muito grandes para escapar pela parede celular. A aplicação de álcool desidrata a peptideoglicana das células gram-positivas para torna-la mais impermeável ao cristal violeta-iodo. O efeito nas células gram-negativas e bem diferente; o álcool dissolve a membrana externa das células gram-negativas, deixando também pequenos buracos na fina camada de peptideoglicana, pelos quais o cristal violeta-iodo se difunde. Como as bactérias gram-negativas ficam incolores apos a lavagem com álcool, a adição de safranina (contracorante) torna as células cor-de-rosa. A safranina fornece à cor contrastante a coloração primaria (cristal violeta). Embora as células