relatório microbiologia

Isolamento de Microrganismos de Solo Obs: Isolamento de microrganismos: Bactérias aeróbias e actinobactérias.
Temperatura de incubação: 28o C.
Meio de cultura utilizado: PCA e AIA.
Repetição: 03 placas de 90 mm de diametro das diluições de 103 , 104 e 105.
Solos coletados: Canavial, solo descoberto, canavial dessecado

Procedimentos para isolamento:
1. Pesar 10g de cada cinco repetições de cada ponto cardeal fazendo uma amostra composta do solo, homogeneizar e retirar 10 g (amostra composta);
2. Em câmara de fluxo laminar,transferir para frasco contendo 90 ml de solução salina 0.9%(diluição101), homogeneizar e com auxílio de uma micropipeta de 1 ml fazer diluição em série transferindo 1 ml para frasco contendo 9 ml de solução salina 0.9%(102). Repetir até a diluição 105;
3. Com micropipeta transferir 100 ml de cada diluição para placa de Petri contendo o meio indicado, espalhar bem com alça de Drigalski, selar, identificar placa e transferir para incubadora com a temperatura de 28o C. Fazer 3 repetições das diluições 103, 104 e 105;
4. Analisar após 24-48 horas; Análise dos DNAs extraídos em gel de agarose Procedimentos:
1. Pesar 1 g de agarose em 100 ml de tampão de corrida (TSB 1X), dissolver em forno microondas, adicionar 2 ul de GelRed, homogeneizar e verter na forma de gel. Após a solidificação transferir a forma junto com gel para cuba de eletroforese; Retirar 5ul da suspensão do DNA extraído, adicionar 1ul de tampão de carregamento 6X, homogeneizar com micropipeta e carregar gel. Na 1ª canaleta carregar 8ul de um padrão molecular /Hind III. Na última canaleta carregar 2ul de um padrão de massa Low Mass ;
1. Fechar a cuba e aplicar uma voltagem de 60 V por 30 minutos;
2. Retirar gel da forma, transferir para um transiluminador e observar bandas de DNAs;
3. Registrar imagem em um sistema de fotodocumentação de gel;