relatorio

Laboratórios de Bioprocessos
2º Semestre

TRABALHO PRÁTICO 2:
Produção de β-galactosidase por Kluyveromyces marxianus

Docente: José Oliveira

Realizado por:
Pedro Silva, 61733
Sandrina Gonçalves, 63314
Sónia Antunes, 62112

(PL4, Grupo 5)

Data de entrega: 28/06/2013
Sumário
O presente trabalho tem como principal objetivo utilizar a lactose, com concentração de 20 g/L (meio 1) e de 50 g/L (meio 2), para produzir β-galactosidase através de Kluyveromyces marxianus. A enzima β-galactosidase desempenha um importante papel no processamento de produtos lácteos.
As fermentações foram realizadas a 30 °C e a pH 5,5. Recorreu-se ao HPLC para analisar a variação das concentrações do substrato e dos produtos ao longo do processo fermentativo. O método de DNS permitiu analisar o consumo de lactose e a variação da concentração de açúcares redutores ao longo do tempo de fermentação.
Para determinar a concentração da biomassa recorreu-se ao método do peso seco. O método de ONPG e de Bradford permitiram determinar a actividade enzimática e dosear a proteína, respectivamente. A rutura celular realizou-se através da técnica das esferas de vidro.
Os valores de μmax obtidos foram de (0,41 ± 0,04) h-1 para o meio 1 e (0,45± 0,05) h-1 para o meio 2. Apenas para o meio 2 foram visíveis as quatro fases características do crescimento microbiano, onde ocorreu um consumo total da lactose.
Obtiveram-se valores de YP/S muito próximos do valor teórico, e a produtividade em etanol é maior para o meio 2, ou seja, a reacção é mais propensa para concentrações de lactose superiores. Os valores obtidos para a atividade enzimática específica não corresponderam ao esperado, provavelmente devido a uma rutura pouco eficiente.

Índice
Pág.

1 Introdução

1.1 Características gerais de Kluyveromuces marxianus

A espécie Kluyveromyces marxianus pertence ao grupo dos fungos e são microrganismos heterotróficos, que necessitam de compostos