Invertase

1-Introdução

A invertase (nome sistemático: beta-frutofuranosidase), ou sacarase, é a enzima responsável pela liberação do resíduo L-Dfructofuranosidio não-redutor, a partir da molécula de dissacarídeo. Seu substrato preferencial é a sacarose, resultando na sua hidrólise uma molécula de glicose e outra de frutose.

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Historicamente, esta enzima tem grande importância, uma vez que foi a primeira proteína a ser identificada como um biocatalisador. Também, foi a partir de estudos com invertase, que foram construídos os princípios fundamentais da enzimologia, como a hipótese de chave-fechadura para atividade enzimática ,a equação de Michaelis-Menten, o conceito de ponto isoelétrico e a hipótese de Briggs & Haldane ,em que o complexo formado entre enzima e substrato não representa um equilíbrio, mas sim um estado estacionário.
Para o uso industrial, a invertase é comumente obtida de leveduras. É sintetizada também por abelhas, as quais a utilizam para fazer o mel a partir do néctar.

A invertase é cara, então quando é necessária frutose, pode ser preferível fazê-la a partir da glicose utilizando a glicose isomerase.

2-Objetivo

Determinar a concentração do açúcar redutor produzido a partir da sacarose por ação da invertase,e o efeito da concentração do substrato sobre a velocidade da reação

3-Procedimento

Atividade da enzima

A)Curva-padrão para açúcar redutor.

Numerou-se tubos de 1 a 5 em duplicata, adicionou-se respectivamente 1, 0,6 , 0,4 , 0,8 e 1,0 mL de água, em seguida adicionou-se 0 , 0,4 , 0,6 , 0,8 , 1,0 mL Solução padrão de glicose a 0,01%, e 1 mL de reativo de Smooggy. Agitou-se bem e levou-se ao banho maria por 10 minutos. Feito isso, adicionou-se 1 mL de reativo de Nelson e 7 mL de água em cada tubo de ensaio. Fez a leitura de comprimento de onda à 530 nm.

B) Efeito da concentração do substrato sobre a velocidade da reação

Numerou-se tubos de 1 a 6 e adicionou-se respectivamente 1,0 , 0,8 , 0,6 , 0,4 , 0,2 ,